[发明专利]一种C反应蛋白半定量检测试剂及应用该试剂的试纸

说明书

技术领域

本发明涉及一种分子生物学领域C反应蛋白检测试剂及应用该试剂的试纸，特别是一种C反应蛋白半定量检测试剂及应用该试剂的试纸。

本专利文件中所涉及之术语含义：

0.9％Nacl：表示配置完成后的溶液中每100mL含Nacl0.9g。

类似格式均表示类似含义，本文另有说明的除外。

背景技术

C反应蛋白，1930年Tillet和Francis在急性大叶性肺炎患者血清中发现能在钙离子存在时与肺炎球菌C多糖起沉淀反应而得名，是人类重要的急性期反应蛋白，急性期浓度可升高上千倍，循环中的CRP半衰期为19小时。人类CRP是由肝脏产生，由五个相同的亚基依靠非共价键形成的环状五聚体，这一特征性结构使其归类于五聚素(一组具有免疫防御特性的钙结合蛋白)家族。低等动物同样存在CRP，如在鲎、河蚌等中也发现过，但并不一定起急性期反应蛋白的作用。CRP特征反应是能在钙离子存在的条件下特异性结合磷酸胆碱基团。

人高敏C反应蛋白(Human C-reactive protein，CRP)，简称HS-CRP，因其能和肺炎双球菌的细胞壁的C多糖起沉淀反应而得名，是相对分子质量为115-140KD的血清β球蛋白。CRP持续增高提示机体存在慢性炎症或自身免疫疾病，CRP在病毒感染时不会升高，其变化不受患者的个体差异、机体状态和治疗药物的影响。近年来，随着检测技术的进步，采用超敏感方法检测到的CRP被称为超敏CRP。大量的文章研究显示，它在冠心病、中风、周围血管栓塞等疾病诊断和预测中发挥越来越重要的作用，甚至被认为是心血管病危险评估的“金标准”。从检测角度上来说，目前临床上用于测定HS-CRP的方法主要有放免法、ELISA法、化学发光法等。

CRP是由5个完全相同的非糖基化的亚单位非共价联结，每个亚单位相对分子质量23017，由206个氨基酸残基组成。CRP这种盘状五聚体特征结构使其归于五聚素(pentraxins)家族。

CRP是在组织受损、发炎或感染时，经细胞因子如白细胞介素6(IL-6)等诱导，主要在肝脏中合成，为急性期时相反应蛋白。CRP在健康人血清中浓度很低，但对炎症反应非常敏感，炎症开始4h～7h其浓度就显著升高，是非特异性的炎症指示剂。CRP水平可以反映机体潜在的炎症活跃程度，广泛应用于临床。

健康人的CRP值非常低，一般小于0.8mg/L，90％的健康人CRP<0.3mg/L。而在炎性反应或急性损伤后，CRP的合成则在4～6h内迅速增加，36～50h达高峰，峰值可为正常值的l00～1000倍。其半衰期较短(4～6h)，经积极合理治疗后，3～7天迅速降至正常。

胶乳颗粒增强比浊法是近年来出现的一种较为稳定、准确的体液蛋白均相免疫比浊检测方法。PETIA法大体分为两种。一种是散射比浊检测法；另一种是透射比浊检测法。这两种方法的基本原理非常相似，都是在高分子胶乳微球的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的散光性能或透光性能。而且，反应液散光性能或透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。PETIA检测方法是在均相反应体系中进行抗原、抗体反应及结果的测定。

由于血清CRP的含量分布差异较大从零点几毫克每升到几百毫克每升，其测定方法需要较高的灵敏度和特异性。目前，免疫比浊法是最为普遍通用的方法，但是传统的CRP检测不适合单人份测试、检测时间较长，并且需要大型的生化检测仪，不适用于规模较小的医院。

发明内容

为解决上述问题，本发明公开了一种C反应蛋白半定量检测试剂及应用该试剂的试纸，该试剂灵敏度高，线性范围宽，生产成低，使用方便，同时该试剂的试纸使用方便，灵敏度高，测试准确，极大地方便了对C反应蛋白的测定。

本发明公开的C反应蛋白半定量检测试剂包括以下组分：

包被用CRPⅠ抗体划线：0.1-3mg/ml；

包被用goat anti rabbit抗体C1线：0.1-1mg/ml；

包被用goat anti rabbit抗体C2线：0.1-1mg/ml；

标记用CRPⅡ抗体：每毫升胶体金中CRPⅡ抗体含量为1-10μg；

标记用兔IgG抗体：每毫升胶体金中兔IgG抗体含量为5-20μg；

金重悬液：含20mM Tris的Tris-Hcl重悬液,pH 7-10；