[发明专利]HER-2基因快速FISH检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种FISH方法及其检测试剂盒，特别HER-2基因快速FISH检测试剂盒。

背景技术

Her2基因编码的酪氨酸激酶-人类表皮生长因子受体2，在正常组织中含有2个拷贝，在20%-30%的乳腺癌患者中有基因的扩增和蛋白的过度表达。HER-2扩增阳性患者的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。曲妥珠单抗（赫赛汀）是一种重组DNA衍生的人源化单克隆抗体，适用于HER-2过度表达的乳腺癌。由于只有HER-2过度表达和基因扩增的乳腺癌患者用曲妥珠单抗治疗才有效，因此正确检测和评定乳腺癌的HER-2状态至关重要。目前通常使用的免疫组织化学方法无法区分HER-2蛋白为中度阳性(IHC检测2+)的患者是否存在HER-2基因的扩增，直接检测HER-2基因扩增水平的荧光原位杂交被认为是检测乳腺癌HER-2基因扩增的“金标准”。

荧光原位杂交（FISH, fluorescence in situ hybridization）是一项在体外直接观察细胞中特定核酸的技术。根据碱基互补配对的原则，特定的DNA序列与细胞内的目标序列互补结合。由于探针带有荧光，在合适的激发光照射下，杂交探针及目标DNA能够在荧光显微镜下被清楚地观察到，是一种直观有效的检测方法。

现有的FISH探针合成后做进一步的荧光标记。短序列探针的序列短，在染色体上的信号弱，为保证可以观察到较为显著的信号，短序列FISH探针一般仅用于重复序列的标记。对于非重复基因序列，探针除需要覆盖除目的基因以外的基因序列，要求探针的长度较大，导致所需要的杂交时间很长（一般是过夜杂16-18小时），不能及时的得到检测结果，这不利于临床的诊断及治疗。

有必要开发出一种HER-2基因快速的FISH检测试剂盒。

发明内容

本发明的目的在于提供一种HER-2基因快速FISH检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

HER-2基因快速FISH检测试剂盒，包括FISH荧光探针，杂交液和染色液，其中，探针的序列分别为：17号染色体特异性探针，其序列为：

探针1：CATTGTCAGAAACTTCTTTGTGATG

探针2：ATTGCATTCAACTCACAGAGTTGA

探针3：AGGTTCCTTTTCAAACAGCAGTTTC 

探针4：CAATCACTCTTTCTGTGGAATCTGC

探针5：AAGTGGATATTTGGGCCTCTCTG

探针6：AGGATTTCGTTGGAAACGGGA 

探针7：AACGGGATAACTGCACCTAACTAA

探针8：ACGGAAGCATTCTCAGAAACTGCT

探针9：TTGTGATGATTGCATTCACCTCAC

探针10：AGAGTTGAACATTCCTATTGATAG

探针11：AGCAGTTTGGAAACACTCTTGTTG

探针12：CATAGAGTAGTTCTGAAACATGC

探针13：CCTGTGGTGGAAAACGAATTATG

探针14：ATATGTGGACCTCTCCGAAGATG

探针15：ATATGTGGACCTCTCCGAAGATG

探针16：CATTCTCAGAAACTTCTTGGTGATG

探针17：CCACTCTGTGGCCTTCGTTCG

HER-2基因特异性探针，其序列为：

探针1’：CCTTGCACTTGAAAAGGCTC

探针2’：GGAGCGGAAGTGATTCAGAG

探针3’：ACGCCTGATGGGTTAATGAG

探针4’：ACTGGTCTCCCTCACTCCCT

探针5’：CTTGACAAATCCAGGGCTGT

探针6’：TAGCCTGGGATTCCATTCAC

探针7’：AAAACAACCCCTTAGCCCTC

探针8’：CAGAGGTCCTTGAAAACCCA

探针9’：TGAAGGGCAAAGGAAGAGAA

探针10’：TGTGACCAGGAACCATTCTG

探针11’：CAAAAGTGAGGTGAGTCGCA

探针12’：CACCCCTAGGAAGGACCAAT

探针13’：GATCTGAGTTTGCTGCCCTC