[发明专利]用于降解乙草胺的细菌、筛选方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种用于降解乙草胺的细菌、筛选方法及其应用。

背景技术

乙草胺，英文通用名为Acetochlor，由美国Monsanto公司1971年首先开发成功，分子式为C₁₄H₂₀ClNO₂，其分子量为269.5。乙草胺纯品为无色液体，原药为淡黄色、棕色或者紫色透明液体，50％乙草胺乳油为蓝紫色油状物，不易光解，不易挥发，沸点大于200℃，密度为1.11g/mL(30℃)，在强酸强碱下分解，溶于甲醇、丙酮等多种有机溶剂。

研究表明，乙草胺可以作为芽前除草剂，其作用机制主要是通过干扰植物体内核酸代谢及蛋白质合成，使幼芽和幼根停止生长；因此，乙草胺是一种环境内分泌干扰物。所谓“环境内分泌干扰物”是指能通过干扰激素功能，引起个体可逆性或不可逆性生物学效应的环境激素，因此通常又被称作“干扰内分泌化合物”。

另外，相关研究表明，乙草胺可引起爪蟾腹部水肿，面部畸形，脊柱、尾巴弯曲等；因此，Monsanto公司在刚开始推出乙草胺作为农药时，由于被怀疑有致癌作用，美国环保局担心其会通过地下水进入饮水系统并对人类造成安全隐患，因此，其应用一直被受到限制，直到1994年才予以登记进入市场。我国是从20世纪90年代初才开始将乙草胺产业化，现在已有多家企业进行生产，年生产能力达到5万吨。

在农业生产中，除草剂等化学农药的施用一直是保证粮食作物增产稳产有效的手段之一。尤其是随着乙草胺除草剂的大量使用，使得土壤中残存的乙草胺逐渐累积，进而造成严重的土壤污染；另外，乙草胺农药生产过程中产生的废水废气也通过排放以及流失等方式积累到土壤中，进一步的加剧了土壤的污染。但是，乙草胺的自然降解耗时较长，显然不能有效解决土壤中乙草胺逐渐累积的现状。

目前，微生物为农田中农药残留(包括乙草胺)的主要降解者，逐渐成为农药污染土壤生物修复的热点。因此，提供一种能够降解乙草胺的微生物，并将其应用到乙草胺农药土壤的修复中是本领域技术人员亟待解决的一个技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于降解乙草胺的细菌，以解决上述的技术问题。本发明的另一个目的在于提供一种上述用于降解乙草胺的细菌的筛选方法。

在本发明的实施例中提供了用于降解乙草胺的细菌，该细菌为YCA-1(Cupriavidus oxalaticus)，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号为CGMCC No.9127。此外，细菌的保藏时间为：2014年05月06日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，YCA-1为该细菌的简称，Cupriavidus oxalaticus为其拉丁名。

该菌为革兰氏阳性，菌落圆形、乳白色，可利用的碳源包括葡萄糖、淀粉、果糖、阿拉伯糖、苹果酸和柠檬酸。本发明提供的这种YCA-1，其可以乙草胺作为氮源并进行增殖，因此，其可以作为降解乙草胺的微生物并进行利用，通过实验证明，在相应的培养条件下，YCA-1可以使乙草胺浓度为50-150mg/L基础盐培养基中的乙草胺在5天之内完全降解。在具体使用的过程中，可将大量扩培的YCA-1制成以其为活性成分的降解剂并修复含有乙草胺农药的土壤。

本发明实施例还提供了一种上述用于降解乙草胺的细菌的筛选方法，包括以下步骤：

1)、将供试泥样置于含有乙草胺的基础盐液体培养基中，摇床培养后得到第一混合菌液；

2)、将所述第一混合菌液接种到另一含有乙草胺的基础盐液体培养基中，进行传代培养，得到第二混合菌液；

3)、将所述第二混合菌液涂布在含有乙草胺的无机盐固体培养基中，进行暗培养至平板上长出单菌落后分别收集，并利用LB培养基划线纯化，得到多个纯化后的单菌落；

4)、将多个所述纯化后的单菌落接种到含有乙草胺的基础盐液体培养基中，得到多个单菌菌液；

5)、将多个所述单菌菌液分别利用含有乙草胺的基础盐液体培养基摇床培养后，分别测定基础盐液体培养基中乙草胺的残留浓度，并筛选出使得乙草胺浓度降低的单菌菌液，得到细菌YCA-1。

可选的，在步骤1)、步骤2)、步骤4)和步骤5)中：

所述基础盐液体培养基，按照重量份数计，包括：