[发明专利]一种新型的IgM－IgG聚合物及其聚合方法

权利要求书

1.一种新型的IgM－IgG聚合物，其特征在于：所述IgM－IgG聚合物符合结构式（1）所示，

                                                         （1）；

或结构式（2）所示，

         （2）；

式中，n＝1~5。

2.一种新型的IgM－IgG聚合物的聚合方法，其特征在于：依次由下列步骤组成：

第一部分，IgM与S-乙酰硫代乙酸琥珀酰亚胺酯的交联

第一步，将IgM免疫球蛋白溶于PBS混合缓冲液中得到浓度为1mg/ml的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后装入透析袋中，在2~8℃条件下，在所述PBS混合缓冲液中透析8~15小时；其中，所述PBS混合缓冲液为10mmol/L并且pH为7.4的磷酸盐缓冲液与0.15mol/L氯化钠的混合溶液；

第二步，移出第一步中透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液，然后向透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液中缓缓加入新鲜配制的浓度为10~50mmol/L S-乙酰硫代乙酸琥珀酰亚胺酯的二甲基亚砜溶液，震荡混匀，15~35℃下反应25~35分钟得反应液；反应结束后，将反应液装入透析袋中，在2~8℃条件下，在所述PBS混合缓冲液中透析8~15小时；其中，所述透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液中的IgM免疫球蛋白与所述S-乙酰硫代乙酸琥珀酰亚胺酯的摩尔比为1:10~1:30；所述透析后的IgM免疫球蛋白缓冲液中的IgM免疫球蛋白与所述浓度为10~50mmol/L S-乙酰硫代乙酸琥珀酰亚胺酯的二甲基亚砜溶液中的S-乙酰硫代乙酸琥珀酰亚胺酯反应生成的产物为IgM-SATA，其结构如式（3）所示，得到IgM免疫球蛋白初聚液，

             （3）；

第三步，向第二步得到的IgM免疫球蛋白初聚液中缓缓加入新鲜配制的羟胺溶液，混匀后，15~35℃下反应1.5~2.5小时，其中，所述羟胺溶液是指含有0.5mol/L羟胺、25mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L且pH值为7.4的磷酸盐缓冲液以及0.15mol/L氯化钠的混合溶液；反应结束后，将反应液装入透析袋中，在2~8℃条件下，在所述PBS混合缓冲液中透析8~15小时，得到IgM免疫球蛋白中聚液；其中，所述IgM免疫球蛋白初聚液与所述羟胺溶液的反应体积比为10:1；所述IgM免疫球蛋白初聚液与所述羟胺溶液中的羟胺发生脱酰基反应，生成的产物为IgM-SH，其结构如式（4）所示，

          （4）；

第二部分，IgG与4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯的交联

第一步，将IgG免疫球蛋白溶于所述PBS混合缓冲液中得到浓度为1mg/ml的IgG免疫球蛋白缓冲液，然后装入透析袋中，在2~8℃条件下，在所述PBS混合缓冲液中透析8~15小时；

第二步，移出第一步中透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液，然后在透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液中缓缓加入新鲜配制的浓度为1.5mg/ml 4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯的PBS溶液，震荡混匀，15~35℃下反应25~35分钟得反应液；反应结束后，将反应液装入透析袋中，在2~8℃条件下，在所述PBS混合缓冲液中透析8~15小时，得到IgG免疫球蛋白初聚液；其中，所述透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液中的IgG免疫球蛋白与所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯的PBS溶液中的4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯之间的摩尔比为1:20；

所述透析后的IgG免疫球蛋白缓冲液中的IgG免疫球蛋白与所述4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯的PBS溶液中的4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯反应生成的产物为马来酰亚胺激活的IgG，其结构如式（5）所示，

          （5）； 

第三部分，IgM免疫球蛋白中聚液与IgG免疫球蛋白初聚液的交联

第一步，将所述IgM免疫球蛋白中聚液与所述IgG免疫球蛋白初聚液装入透析袋中并混匀，在2~8℃条件下，反应1.5~2.5小时；然后于所述PBS混合缓冲液中透析8～15小时，得到IgM－IgG免疫球蛋白聚合物原液；其中，所述IgM免疫球蛋白中聚液中的IgM免疫球蛋白和所述IgG免疫球蛋白初聚液中的IgG免疫球蛋白的摩尔比为1:1~5，所述IgM免疫球蛋白中聚液中的IgM免疫球蛋白与所述IgG免疫球蛋白初聚液中的IgG免疫球蛋白反应，生成的产物为IgM-马来酰亚胺-IgG，其结构如式（6）所示，

          （6）；

第二步，将得到的所述IgM－IgG免疫球蛋白聚合物原液过葡聚糖凝胶G200柱，再以所述PBS混合缓冲液洗脱，流速为0.25ml/分钟，分管收集洗脱后的溶液，并测OD280nm吸光值，将测得的第一峰的各管溶液混合，再将混合后的溶液浓缩至约2mg/ml，此即为纯化的IgM－IgG聚合物终产物。