[发明专利]多色高危HPV荧光检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种HPV荧光检测试剂盒，特别涉及一种多色高危HPV荧光检测试剂盒。

背景技术

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌为45～55岁，近年来其发病有年轻化的趋势。宫颈癌的早期发现和治疗是有效治疗宫颈癌的关键。

现有研究表明，宫颈癌的主要病因是由高危型人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）的持续感染或反复感染所致。90%以上的宫颈癌伴有高危型HPV感染，高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要危险因素。因此，HPV DNA检测在世界范围内多个国家已经成为宫颈癌筛查和健康管理的一个重要部分。人乳头瘤病毒有多种基因型，依据不同型别与宫颈癌发生危险性的高低可将其分为低危型和中高危型HPV。HPV DNA检测的主要意义在于：1）基于液基细胞学结果决定患者是否需要进一步进行阴道镜检查；2）液基细胞学异常而阴道镜检或活检阴性患者随访；3）高级别宫颈上皮内病变患者临床处理后治疗结果预测；4）年龄≥30岁女性联合巴氏涂片针对宫颈癌早期筛查。

现有的运用荧光PCR方法进行高危型人乳头瘤病毒基因分型检测的技术的缺点主要是扩增灵敏度低，耗时长。前期一般都需要经过步骤繁琐的核酸提取，然后运用普通Taqman探针的方法进行多重PCR扩增，而且一般都是FAM和HEX两通道检测，无法具体分区高危HPV型别，难以满足实际使用的需要。

开发出可以快速、高效的HPV高危型检测试剂盒，具有非常实际的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种多色高危HPV荧光检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

多色高危HPV荧光检测试剂盒，包括热启动Taq酶系统、通用引物、荧光探针、阴性对照和阳性对照，荧光探针为HPV特异性MGB探针，HPV特异性MGB探针的序列如下：

探针1  TTGGCATAATCAATTATTT

探针2  TGGGGCAATCAGTTRTTTGT

探针3  CTGATTGTTCCARCARATG

探针4  AATCAGTTGTTTGTTACTGT

探针5  TTTRTTACCTGTGTTGATAC

探针6  TAACTGTTGTGGATACCAC

探针7  TATATGTTGGCACAATCAA

探针8  TGGTTACCCCAACAAATG

探针9  TAATTGATTATGCCAGCAAACA

探针10       TTACCTGTGTTGATACYAC

探针11       CTGATTGCCCCAACAAAT

探针12       TATWTGTTGGCATAATCAATTA

探针13       ACAAAYAACTGATTGCCCCA

探针14       ACTACAGTAACAAAYAATTG

探针15       ACAAACAACTGATTATGCCAAC

探针16       CTCATTTGGCTACTGTAAATGCAGACAC

探针17       TTCAGGATACTGCCCCGGACAGTAGG

探针18       CTCCTAAATACATTGCTGGACAAAATAC；

上述探针的3’端连接有MGB，5’端连接有荧光基团，其中，三色高危HPV荧光检测试剂盒探针1～15分别用于检测15种常见高风险HPV基因型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82；探针16～18分别用于检测三种少见高风险HPV基因型26、53、73。四色高危HPV荧光检测试剂盒探针1用于检测常见高风险HPV基因型16型；探针2用于检测常见高风险HPV基因型18型；探针3～18分别用于检测另外13种常见高风险HPV基因型31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82和三种少见高风险HPV基因型26、53、73。

优选的，上述多色高危HPV荧光检测试剂盒中所使用的通用引物为：

引物1 GCMCAGGGWCATAAYAATGG

引物2 GCTCAGGGTTTAAACAATGG

引物3 GCCCAGGGCCACAATAATGG

引物4 GCNCAGGGNCACAATAATGG

引物5 GCNCAGGGNCATAACAATGG