[发明专利]一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法

说明书

技术领域

本发明属于抗生素提取、合成技术领域，特别是涉及一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法。

背景技术

粘杆菌素是由多粘芽肥杆菌变种粘菌素（Bacillus polymyxa var. colistinus）产生的碱性多肽类抗生素，其含有30多种不同成分的混和物，主要为粘杆菌素A（多粘菌素E1）和粘杆菌素B（多粘菌素E2）的混合物。对多数革兰氏阴性菌有效。被视为“最后一线药物”。

目前，国内采用离子交换法、膜过滤方法或沉淀法提取粘杆菌素，存在的主要问题是：

1 采用膜过滤法提取粘杆菌素，首先提取过程中产生的废水较多，其次膜过滤设备需定期进行维护和保养，导致生产成本较高。

2 沉淀法和离子交换法提取粘杆菌素，其生产周期较长，工艺复杂，导致提取收率较低，一般不超过80%。

3 采用以上工艺提取粘杆菌素，粘杆菌素A和B组份总量不超过90%，杂质含量偏高。

4 以上方法不能有效地提取、分离粘杆菌素A和B组份。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高提取收率，降低成本，缩短生产周期，减少环境污染，实现稳定、有效分离的从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种从粘杆菌素发酵液中分离粘杆菌素A和粘杆菌素B的方法，其特征在于粘杆菌素发酵液经预处理、降膜浓缩、萃取、层析、反萃取、喷雾干燥后得到多粘素E1和E2的盐粉末。

所述预处理是指将发酵液加入饮用水，发酵液的粘度将至400～500Pa.s；温度降温至0～10℃，加入10～15%的草酸溶液，调节pH至2～3；加入0.5～0.8%的絮凝剂，搅拌20～30min并过滤，其中所述絮凝剂为氨甲基聚苯乙烯或阳离子聚丙烯酰胺。

所述降膜浓缩是指利用逆流降膜浓缩蒸发设备，将粘杆菌素滤液体积浓缩30～50%。

所述萃取是指用高速离心分离机进行二级逆流萃取处理，将粘杆菌素从水相转移到复合有机溶媒项中，其萃取的工艺控制参数分别是：

a 萃取温度：0～10℃；

b V_{粘杆菌素滤液}︰V_有机溶媒=1︰5～10(L/L)，

，

c pH：一级萃取pH控制在8～9；二级萃取pH控制在9～10；

d 萃余液效价在1000u/ml以下，

所述有机溶媒是指醋酸丁酯和丁醇的混合物，其中丁醇的含量为5～10%。

所述层析过程为：

a 填充剂为DEAE高流速琼脂糖微球装入玻璃柱中，用量为萃取液体积的3～5%，并且径高比为5∶1。

b 层析前，萃取液的温度控制在0～10℃；

c 每次萃取液上样量为填充剂用量20～30%；

d 层析过程中，洗脱剂是醋酸丁酯，其用量为萃取液体积的40～50%；

e 层析过程中，粘杆菌素萃取液经分层后，分别收集多粘素E1和E2溶液。

所述反萃取是指在酸性条件下，多粘素E1或E2从有机溶媒相转入到水相当中，本工艺采用二级反萃取，其工艺控制点主要是：

a 温度：反萃取过程中，温度应控制在0～5℃；

b pH：一级控制pH值3.5～4.5；二级控制pH值2.0～3.0；

c 效价：废醋酸丁酯效价应在500μ/ml以下；

d 浓度：硫酸溶液浓度为3.6～3.8％（W/V）；

e 搅拌时间：加酸后搅拌时间：一级反萃取20～35min ；二级反萃取15～25min；

f 澄明度：反萃取液澄清透明，无可见溶媒；

g 水相用量：

一级反萃取：V_硫酸滤液︰V_有机溶媒=1︰3～5(L/L)，

二级反萃取：V_硫酸滤液︰V_有机溶媒=1︰5～8(L/L)，

所述喷雾干燥是利用高压往复泵将料液喷成细小雾滴，在干燥塔顶部鼓入的干燥热风将雾滴瞬间干燥，废气体排出塔体外，干燥后粉末沉降到底部收集起来。工艺控制参数为：

a 进料压力：6～12MPa。

b 进料转速：250～450r/min。

c 进风温度：140～160℃；出风温度：30～60℃。

d 塔内温度60～80℃。

本发明的技术优势：