[发明专利]一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基和补料方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基和补料方法。

背景技术

恩拉霉素(enramycin)是由杀真菌链霉菌发酵而得，是不饱和脂肪酸与十几种氨基酸结合的多肽类抗生素，主要组分有恩拉霉素A和恩拉霉素B，主要是以盐酸盐形式应用。目前，国内恩拉霉素的发酵生产采用二级发酵模式，该方式存在的主要问题有以下几点：

1 恩拉霉素发酵水平较低，其发酵单位低于8000u/ml。

2 国内发酵生产恩拉霉素的培养基中加入葡萄糖，经高温灭菌，易导致部分葡萄糖碳化，降低总糖含量，影响发酵液质量。

3 恩拉霉素发酵生产所需的原材料采购成本较高，特别是恩拉霉素培养基中常用的有机氮源市场价格较高，提高发酵成本，降低市场竞争力。

4 国内恩拉霉素的发酵培养周期较长，一般在260h以上，导致能耗较高。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，降低生产成本，实现恩拉霉素稳定、高效的生产的杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基；

本发明的另一目的是提供上述杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的补料方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种杀真菌链霉菌发酵生产恩拉霉素的培养基，包括种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述种子培养基组成为：玉米油15～20ml/L、α-乳糖5～10g/L、乳糖酶0.01～0.03g/L、配方鱼粉20～25g/L、啤酒酵母干渣15～20g/L、玉米浆干粉10～15g/L、蚯蚓粉5～10g/L、硫酸铵0.2～0.5g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述发酵培养基组成为：玉米油20～30ml/L、α-乳糖20～25g/L、乳糖酶0.02～0.05g/L、配方鱼粉30～40g/L、啤酒酵母干渣15～20g/L、玉米浆干粉15～20g/L、蚯蚓粉10～15g/L、硫酸铵0.3～0.7g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、硫酸镁0.03～0.06g/L、硫酸锌0.02～0.04g/L、磷酸二氢钾0.5～0.9g/L、氯化钠0.3～0.7g/L、氯化钾0.2～0.5g/L、表面活性剂1.5～2.5g/L、氧载体4～7g/L。

所述配方鱼粉是由鱼粉、骨粉和羽毛粉按照重量比7:3:1混合而得。

所述氧载体为吐温80或全氟化碳。

所述表面活性剂为聚氧乙烯烷基醇酰胺或甘油酯或聚甘油酯或聚乙二醇硬脂酸酯或十八烷基二羟乙基氧化胺。

利用上述培养基发酵生产恩拉霉素的补料方法，其特征是：在发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补培养基、补水、补硫酸铵、pH控制和补氨基酸，其中

a 补培养基：

发酵前70h不用进行补料，

发酵时间在71～90h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总体积的3～5%，

发酵时间在110h～130h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总体积的2～4%，

发酵时间在150h～180h，按照发酵培养基配方补碳源和氮源，其补入量为发酵培养基总体积的1～2%；

b 补水：

发酵前80h不用进行补水，

发酵时间在81～160h，当菌体浓度高于55%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在50～55%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度，

发酵时间在161h～发酵结束，当菌体浓度高于50%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40～50%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度；

c 发酵过程pH控制工艺：

发酵前80h，pH不进行控制，

发酵时间在81～100h，若pH＜6.5，加入10～20%的氢氧化钠，调节pH至6.6～6.9；若pH＞7，加入20%的硫酸铵溶液，调节pH至6.6～6.9，

发酵时间在101～180h，若pH＜6.2，加入10～20%的氢氧化钠，调节pH控至6.3～6.6；若pH＞6.6，加入30%的硫酸铵溶液，调节pH至6.3～6.6；

d 补入氨基酸：

发酵前80h，不用补入氨基酸，

发酵在81h、130h和170h分别补入浓度为0.2～0.5mg/L的丝氨酸、半胱氨酸和精氨酸，其补入量为发酵液体积的0.1～0.3%（这一过程是分别加入这三种，还是每次加入混合液？）

e 补硫酸铵：