[发明专利]一种从发酵液中提取他克莫司的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学领域。具体而言，本发明涉及一种从发酵液中提取他克莫司的方法，更尤其，本发明涉及一种结合使用陶瓷膜、纳滤膜并结合使用有机溶剂将发酵液中的他克莫司以异常高的收率提取出来的方法。

背景技术

他克莫司（Tacrolimus）又名FK506，是从链霉菌属（streptomycestsukubaensis）中分离出来的发酵产物，其化学结构属于23元大环内酯类抗生素。为一种强力的新型免疫抑制剂，近年来已成为肝、肾移植的一线用药，也在自身免疫性疾病中发挥着积极作用。

目前从发酵液中提取他克莫司的方法基本是（1）用板框压滤机或离心机实现菌丝体和水相的分离，用有机溶剂浸泡菌丝体提取脂溶性目标组分。上述方法的缺点是部分游离在水相中的脂溶性目标组分在菌丝体和水相分离时随水相进入废水中；操作对环境不友好，有机溶剂耗用量大；因菌丝体中成分复杂，在有机溶剂提取过程中易造成大量乳化，进而影响收率和质量；板框的装拆、滤饼出料和滤布的清洗都为手工操作，并且辅助时间长，劳动强度大，生产效率低，从而影响整个生产的进度，与环保要求的符合度较低。（2）用有机溶剂直接在发酵液中浸提他克莫司。上述方法的缺点是溶剂耗用量大，易乳化，质量和收率不稳定。

现代膜分离技术起源于20世纪60年代，是一种新型的流体分离单元操作技术。它以高分子分离膜为分离介质，以压力差、浓度差、电位差等为传质驱动力，将待分离流体中的不同物质按照分子量、颗粒或电荷的不同进行分离。由于膜分离技术具有高效节能等特点，自第一套工业化设备推向市场以来，得到了迅猛发展，目前已遍及几乎所有工业领域。按照膜分离的不同原理，可以把膜分成过微滤膜、超滤膜、纳滤膜、反渗透膜、透析膜、电渗析膜、渗透汽化膜以及气体分离膜等不同种类。

陶瓷膜是微滤膜中的一种，主要由Al₂O₃，ZrO₂，TiO₂和SiO₂等无机材料制备的多孔膜，其孔径为1－200nm。具有化学稳定性好，能耐酸、耐碱、耐有机溶剂；机械强度大，可反向冲洗；抗微生物能力强，耐高温，孔径分布窄，分离效率高等特点，在食品工业、生物工程、环境工程、化学工业、石油化工、治金工业等领域得到了广泛的应用。

陶瓷膜过滤是溶有有效成分的浸提液不停的向透出侧透出的过程，与传统的将固液分离过滤模式不同，因而整个过滤过程都不需要添加助滤剂。

纳滤膜是允许溶剂分子或某些低分子量溶质或低价离子透过的一种功能性的半透膜，它截留有机物的分子量大约为150－500左右，被用于去除地表水的有机物和色度，脱除地下水的硬度，部分去除溶解性盐，浓缩果汁以及分离药品中的有用物质等。

中国专利CN1297475公开了一种用陶瓷膜从发酵液中分离水溶性产物的方法；中国专利CN1699358公开了一种用陶瓷膜分离茶黄素的方法；中国专利CN1775729公开了一种用陶瓷膜提取高纯的柠檬酸的方法；中国专利CN101565395公开了一种用陶瓷膜提取L-色氨酸的方法，上述专利都是用陶瓷膜来过滤分离水溶性的目标产物，目前还没有发现用陶瓷膜来过滤收集脂溶性成分的专利和报道，更未发现用陶瓷膜和纳滤膜结合分离他克莫司的专利和报道。

发明内容

本发明致力于提供一种更简单有效、环保、成本低的用于从发酵液中以高收率提取他克莫司的方法，即使发酵液的质量很差。

用于从发酵液中提取他克莫司的本发明的方法包括：

a）用陶瓷膜浓缩发酵液，接着

b）向发酵液浓缩液中持续加入一种或数种选自醇、二醇、酮、酯类、羧酸类有机溶剂或上述溶剂与水的混合物并使用陶瓷膜浸提后得他克莫司浸提液，接着

c）用纳滤膜浓缩他克莫司浸提液得他克莫司纳滤浓缩液。

本发明本发明涉及一种从发酵液中提取他克莫司的方法，更尤其，本发明涉及一种结合使用陶瓷膜、纳滤膜等设备，用有机溶剂将发酵液中的他克莫司以异常高的收率提取出来的方法。

总的来说，从发酵液中提取他克莫司的方法包括用陶瓷膜浓缩发酵液，向发酵液浓缩液中持续加入一种或数种选自醇、二醇、酮、酯类、羧酸类有机溶剂或上述溶剂与水的混合物并使用陶瓷膜浸提后得他克莫司浸提液，用纳滤膜浓缩浸提液。

陶瓷膜浓缩过程中可向发酵液中加入水、表面活性剂、酸、碱、有机溶剂与水的混合物或者改变发酵液温度以改变发酵液性质。