[发明专利]以沼气池废液为原料培养直舟形藻的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种以沼气池废液为主要原料培养直舟形藻的培养基，其特征在于配方如下：

沼气池废液85毫升，硅酸钠5毫克，磷酸二氢钾8毫克，硝酸铵6毫克，甘露醇3毫克，生长素贮液2毫升，碳酸氢钠200毫克，苹果酸钠2毫克，柠檬酸铁5毫克，P₁微量元素溶液3毫升，吲哚乙酸1毫克，乙酸钠5毫克，谷氨酸钠10毫克，苯甲酸钠5毫克，硬脂酸镁8毫克，羧甲基纤维素钠12毫克，D-异抗坏血酸钠3毫克，海藻酸丙二醇酯5毫克，β-胡萝卜素12毫克，α-萘乙酸0.2毫克，土壤浸出液1毫升，海泥浸出液1.2毫升，二氧化氯消毒海水1000毫升；

其中，生长素贮液配方：生物素1毫克，维生素B₁100毫克，烟酸0.1毫克，对氨基苯甲酸10毫克，蒸馏水1000毫升；P₁微量元素溶液配方：乙二胺四乙酸1000毫克，氯化钴1毫克，氯化锌5毫克，氯化铜40微克，氯化锰40毫克，氯化铁10毫克，蒸馏水1000毫升。

2.一种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征在于具体步骤如下：

培养容器为容积25升白塑料桶，市场有售，食品级聚乙烯材料制成，无缝一体式结构，坚固耐用，有良好透光性，以利直舟形藻进行光合作用，水桶顶部有一圆形盖子，上有旋丝，可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米。还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个25w节能灯，将白塑料桶先用砂滤海水洗净，再用工业用盐酸浸泡、消毒10-15分钟，然后用冷开海水冲洗3遍，装入权利要求1所述的培养基15升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的直舟形藻接种，接种密度6×10⁴cell/mL，盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，35厘米，顶端露出盖子10厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气，(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)；另一根较短，14厘米，两端露出盖子即可，用以排气，两根玻璃管同样粗细，用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气∶纯二氧化碳∶臭氧∶甲烷＝92％∶6％∶1％∶1％，连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室外培养，太阳光照射，最佳温度25±2℃，最佳光照强度4000-9000Lux，夜间打开节能灯进行照明，培养的前6天，塑料桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在2000-4000Lux，避免强烈阳光对细胞造成光伤害，第7天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第8天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基3升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，直舟形藻密度增加至500×10⁴cell/mL，停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶用砂滤海水洗净，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；

所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份85％乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料：土荆皮30～50份、杠板归15～25份、黄柏15～25份、苦参5～15份、艾叶5～15份、辅料3-5份；消毒液制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70℃下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30～50份、杠板归15～25份、黄柏15～25份、苦参5～15份、艾叶5～15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85％乙醇，浸泡48小时，200筛绢过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2∶1∶1；将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4℃冰箱备用。

3.根据权利要求2所述的一种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。

4.根据权利要求2所述的一种以沼气池废液为主要原料养殖直舟形藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。