[发明专利]猪BCL-XL基因在抗PRRS病毒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及猪BCL-XL基因在抗PRRS病毒中的应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)，俗称“蓝耳病”是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的，该病毒是巢状病毒目动脉炎病毒科的一个成员，同属的病毒还有马动脉炎病毒、鼠乳酸脱氢酶病毒和猴出血热病毒。该病主要引起猪的繁殖与呼吸症状，表现为间质性肺炎和母猪流产木乃伊胎等，每年对全世界的养猪业造成了巨大的经济损失。2007年在中国爆发了一场高热病，该病迅速在全国范围蔓延，超过200万头猪被感染，40万头猪死亡，该病最后证实是由一种高致病性的蓝耳病毒引起的。PRRSV主要感染猪的肺泡巨噬细胞，现在研究表明在感染PRRSV后，先天免疫中PRRSV感染不能引起有效的I型干扰素应答，体液免疫不能及时产生有效的中和抗体，而且会形成抗体依赖的病毒增强效应，最终导致免疫抑制和持续感染。由于该病毒的突变率极高，传统疫苗方法也不能有效控制该病，很多研究都致力于寻找RNAi、干扰素等新的方法来针对该病毒，用于弥补传统方法的不足。

发明内容

本发明的目的是提供猪BCL-XL基因在抗PRRS病毒中的新用途。

为了实现本发明目的，本发明提供猪BCL-XL基因在抗PRRS病毒中的应用，其是通过猪BCL-XL基因的CDS序列在细胞中的过表达来抑制PRRS病毒在细胞中的复制。本发明中涉及的猪BCL-XL基因的CDS序列如下：

i)Seq ID No.1所示的核苷酸序列；或

ii)Seq ID No.1所示的核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个核苷酸且表达相同功能蛋白质的核苷酸序列；或

iii)在严格条件下与Seq ID No.1所示序列杂交的核苷酸序列；

所述严格条件为在含0.1％SDS的0.1×SSPE或含0.1％SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下杂交，并用该溶液洗膜。

本发明还提供猪BCL-XL基因的表达载体，优选地，所述表达载体的出发载体为pCMV-Myc-N，在出发载体pCMV-Myc-N中导入猪BCL-XL基因的CDS序列。

本发明还提供含有上述表达载体的工程菌。

本发明还提供含有上述表达载体的转基因细胞系。所述转基因细胞来自除胚胎细胞外的猪体细胞。

本发明还提供一种制备克隆胚胎的方法，其是以上述转基因细胞为核移植供体细胞，离体的卵母细胞为核移植受体细胞，通过核移植技术获得克隆胚胎。

本发明还提供一种制备抗PRRS病毒转基因猪的方法，其是将猪BCL-XL基因的CDS序列整合至猪基因组中，从而实现在猪中过表达BCL-XL基因。

本发明进一步提供一种筛选抗PRRS病毒猪的方法，即根据猪BCL-XL基因表达量筛选抗PRRS病毒猪。BCL-XL表达量高的猪比BCL-XL表达量低的猪具有更高的抗PRRS病毒感染能力。

本发明提供的与抗蓝耳病相关的新基因BCL-XL属于Bcl-2家族，它编码的蛋白是一种位于线粒体膜上的跨膜蛋白。BCL-XL是一种重要的细胞凋亡信号通路调节因子，它可以通过抑制细胞的凋亡来增加细胞生存的时间。有研究表明，BCL-XL与HIV的感染，复制有关，但是目前没有实验表明，过表达BCL-XL会抑制PRRS病毒的复制。本发明首次发现，过表达BCL-XL可以显著抑制PRRS病毒在MARC145细胞中的复制。

本发明发现的新的抑制PRRSV复制的猪BCL-XL基因主要包括以下两个用途：

(一)可以通过对猪的BCL-XL基因的表达量的测定，筛选抗PRRS病毒猪。分析表明，相对于没有过表达BCL-XL基因的细胞，过表达BCL-XL基因的细胞可以显著抑制PRRS病毒的复制，因此，BCL-XL表达量高的猪可能会比BCL-XL表达量低的猪更加抗PRRSV的感染，从而达到根据BCL-XL基因的表达量高低来筛选抗PRRSV的猪。

(二)可以利用转基因等基因工程技术手段，使得BCL-XL基因在猪中的表达量升高，从而得到BCL-XL表达量高的猪，进而培育出抗PRRSV的猪。

附图说明

图1为本发明实施例1中转录组数据分析得到的BCL-XL在通城猪和长白猪感染PRRSV的第0天、第3天、第5天和第7天肺组织中的表达模式和相对表达量；横坐标代表时间点，纵坐标代表相对表达量(RPKM)。

图2为本发明实施例2中原始载体pCMV-Myc-N的载体图谱。