[发明专利]一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法

权利要求书

1.一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，其特征在于：包括获取外植体、正冠组培苗继代芽培养、生根苗培养、生根苗移栽和出圃工序，通过获取消毒灭菌后的外植体，依次接种于初始培养基和增殖培养基后获得正冠组培苗，对正冠组培苗进行不定根诱导生根后移栽，出圃，具体操作步骤如下：

（1）获取外植体：选择优良的无性系嫁接杉木幼树当年生的嫩枝为外植体；将消毒灭菌后的外植体接种到初始培养基内，获取繁殖芽；

（2）继代芽增殖培养：将长1.5～3cm的繁殖芽接种到增殖培养基内，诱导继代芽；待繁殖芽基部萌发出2～3个长0.3～0.5cm的继代芽时进行转接；每次转接，将繁殖芽逐渐剪短至0.3～0.5cm；取剪短后的繁殖芽基部萌发扦插生根用的继代芽，获得正冠组培苗；

（3）生根苗培养：在正冠组培苗中选择繁殖芽基部萌发、生长健壮的继代芽扦插于常用的生根培养基上，在温度25～30℃，2000～7000Lx光照条件下进行不定根诱导，培养10～15d后开始生根，25～30d根长0.4～0.6cm时，获得生根苗，将生根苗转到炼苗室炼苗；

（4）生根苗移栽：炼苗20～30d,待根系由白色转变成灰白色时，将生根苗进行移栽，移栽时先将生根苗置于清水中漂洗，洗净根部的培养基，晾干根系的表面水分，将生根苗栽入装有红心土与椰糠的混合基质容器中培养；

（5）出圃：在容器中的生根苗进行培养8～10月，杉木苗高15～30cm时出圃造林。

2.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，其特征在于：步骤（1）所述的外植体消毒灭菌的方法为：剪除外植体上的叶片，在洗洁精溶液中用毛刷轻轻刷洗，放入质量浓度为0.1%的新吉尔灭中浸泡40～50min，再用纯净水冲洗3～5遍，将外植体剪切成1～2cm的长茎段；在超净工作台用体积浓度75%的乙醇对剪切后的外植体消毒10s，然后将外植体置于10～30mg/L的抗坏血酸中浸泡5～12min；最后用无菌水冲洗3～4遍。

3.根据权利要求2所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，其特征在于：步骤（1）中对外植体进行消毒灭菌，当外植体属于幼嫩茎尖处时，置于10mg/L的抗坏血酸中浸泡5min；当外植体属于半木质化茎段时，置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡8min；当外植体属于木质化茎段时，置于30mg/L的抗坏血酸中浸泡12min。

4.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，其特征在于：步骤（1）所述的初始培养基是以2/3MS为基本培养基，还包括6-BA1.0mg/L、IBA0.5mg/L和ZT0.2mg/L；其中2/3MS基本培养基中的Ca(NO₃)₂含量为150mg/L，Na₂SO₄含量为50mg/L。

5.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，其特征在于：步骤（2）中所述的增殖培养基是以1/2MS为基本培养基，还包括6-BA0.8mg/L、IBA0.4mg/L和ZT0.1mg/L；其中1/2MS基本培养基中的Ca(NO₃)₂含量为150mg/L。

6.根据权利要求1或5任一所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，所述的增殖培养基用500ml的三角瓶分装，每瓶70ml，用棉球封口，再用牛皮纸包扎棉球和瓶口，在120℃和1.1kg.cm²条件下，用高压蒸汽灭菌锅灭菌15min。

7.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，其特征在于：步骤（2）中所述的继代增殖培养控制光照2000～7000Lx，温度25～30℃。

8.根据权利要求1所述的一种杉木正冠组培苗继代芽培育方法，其特征在于：步骤（4）中所述的混合基质是按红心土与椰糠的体积比为3:1的比例混合。