[发明专利]一种表达猪瘟病毒E2基因重组病毒及制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于兽医生物技术领域。本发明涉及一种重组杆状病毒毒株的构建方法。具体涉及一种表达猪瘟病毒E2基因的重组杆状病毒Ac-CSE12的制备方法及其在预防猪瘟感染的亚单位疫苗中的应用。利用本发明的重组病毒表达人工修饰的猪瘟病毒E2基因，可以用于制备安全的猪瘟病毒亚单位疫苗。

背景技术

猪瘟是(Classical swine fever,CSF)是由黄病毒科瘟病毒属猪瘟病毒(Classical swin e fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性、出血性和致死性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。当前猪瘟在我国很多猪场流行，临床上表现为早产、流产、死胎、木乃伊胎及猪生产能力下降等。同时该病与伪狂犬病、圆环病毒感染相关疾病等多重感染和混合感染常常发生。但却没有有效的治疗药物，只能使用疫苗来免疫动物，达到预防疾病的目的。E2蛋白是诱导机体产生中和抗体的主要保护性抗原主要成分，可以抵抗强毒的攻毒保护实验(Weiland et al.,1990；Greise et al.，1990；Dong et al.,2006；Chen et al.,2011；Llilianne Gangesa et al.,2012)，是构建猪瘟新型基因工程疫苗的首选靶蛋白。利用CSFV E2蛋白制备的亚单位疫苗没有非结构蛋白，可以利用检测Erns蛋白的抗体来区分疫苗免疫和野毒感染猪群。目前，猪瘟的流行形势十分复杂。我国流行的猪瘟病毒基因亚型较多，包括2.1，2.2，2.3和1.1亚型；在1994年的台湾也出现基因3型的猪瘟病毒；其中基因2.1(尤其2.1b)亚型在我国广泛流行(涂长春，2004；Weihuan Fang et al.,2007；Luo Y et al.,2014)。尽管猪瘟兔化弱毒疫苗能有效的预防不同基因亚型病毒的感染，但是猪瘟仍在部分区域呈流行态势，并存在代毒与免疫临床发病现象。猪瘟作为我国优先防治的一类动物传染病，仍迫切需要便于鉴别诊断的新型基因工程标记疫苗以及配套的诊断试剂。

近年来，杆状病毒表达载体因其具有操作简单、安全性高，可容纳大的目的基因，表达外源蛋白效率高，有翻译后修饰的作用，表达蛋白的免疫原性、生物活性与天然的蛋白相似等优点,已经在表达载体上占了主导的地位(Anderson et al.,1995；Wang et al.,2001；Ribe iro et al.,2001)。利用杆状病毒表达载体同时表达CSFV 2.1型和1.1型的E2蛋白，制备亚单位疫苗，能同时预防I群和II群猪瘟病毒感染，也利于与野毒感染进行鉴别诊断。

发明内容

本发明的一个目的是提供了一种包含了人工修饰合成的猪瘟病毒2.1型E2基因和1.1型E2基因的融合cDNA基因序列，其序列为SEQ ID NO.1所示，编码的蛋白质为SEQ I D NO.2所示。

本发明的另一个目的是提供一种转移载体pFastBac2E2，该载体分别含有1个拷贝CSF V 2.1型和1.1型免疫原性基因E2基因的cDNA序列。

本发明还有一个目的就是提供一种表达猪瘟病毒E2蛋白的重组杆状病毒，该毒株被命名为Ac-CSE12，属于杆状病毒(Baculovirus)，该病毒含有CSFV 2.1型和1.1型免疫原性基因E2，该病毒于2013年9月9日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC NO:V201338，分类命名：重组杆状病毒Recominant Autographa californica multiple Nucleopolyhedrovirus Ac-CSE12，地址：中国武汉武汉大学。

本发明还有一个目的是提供了一种猪瘟病毒重组杆状病毒Ac-CSE12的制备方法，该方法简单易行，适合大规模生产。

本发明还有一个目的是提供了一种猪瘟重组杆状病毒Ac-CSE12在制备亚单位疫苗中的应用，将该病毒免疫日本大白兔后可诱导机体产生特异性免疫反应，并能免受1.1型和2.1型的CSFV的攻击。重组杆状病毒表达E2蛋白制备亚单位疫苗免疫动物后，可以通过鉴别诊断区分疫苗免疫和野毒感染动物。

更详细的技术方案见《具体实施方式》所述。

本发明的有益效果是：

1.本发明根据密码子的偏爱性，人工修饰合成了CSFV QZ-07毒株的免疫原性基因E2，提高了这些基因在杆状病毒中表达水平。