[发明专利]基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法

权利要求书

1.基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，该方法包括以下步骤：

(1)全血样本中直接提取RNA；

(2)从RNA逆转录产生单链cDNA，将寡核苷酸接头序列连接到单链cDNA的3'末端，采用通用引物和序列为GAC CTC GGG TGG GAA CAC的特殊靶向引物P-VDJ为PCR反应的特殊引物对、连接寡核苷酸接头序列后的单链cDNA为PCR模板进行PCR反应，对免疫受体基因组进行扩增；

(3)高通量测序。

2.根据权利要求1所述的基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，其特征在于：步骤(1)所述全血样本为新鲜血液样本或冰冻的全血样本。

3.根据权利要求1所述的基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，其特征在于：步骤(2)所述逆转录方法为：采用M-MuLV逆转录酶试剂盒对RNA进行逆转录，去除反转录引入的引物，消化RNA模板得单链cDNA。

4.根据权利要求3所述的逆转录方法，其特征在于：所述去除反转录引入的引物的方法为加入AMPure XP磁珠，以80％乙醇洗涤。

5.根据权利要求3所述的逆转录方法，其特征在于：所述消化RNA模板采用RNA酶H和RNA酶A在37℃下消化RNA模板1小时。

6.根据权利要求1所述的基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，其特征在于：步骤(2)所述寡核苷酸接头序列连接到单链cDNA的3'末端采用T4 RNA连接酶试剂盒进行。

7.根据权利要求1所述的基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，其特征在于：步骤(2)所述通用引物序列为GCG GCC GCT TAT TAA CCC。

8.根据权利要求1所述的基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，其特征在于：步骤(2)所述PCR反应条件为：93℃-97℃下变性2min-3min，68℃-72℃下退火延伸4min-6min，加入特殊靶向引物P-VDJ后63℃-67℃下退火，68℃-72℃下延伸，30-40个循环。

9.根据权利要求1所述的基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，其特征在于：步骤(2)所述高通量测序采用IIIumina的HiSeq-2500测序器。