[发明专利]多羟基甾醇类单体化合物的制备方法和应用有效

专利信息
申请号: 201410442533.5 申请日: 2014-09-02
公开(公告)号: CN104262443A 公开(公告)日: 2015-01-07
发明(设计)人: 孙雪萍;徐艳;黄国强;杨家林;刘海娟 申请(专利权)人: 广西壮族自治区海洋研究所
主分类号: C07J9/00 分类号: C07J9/00;A01N45/00;A01P7/00
代理公司: 北海市海城区佳旺专利代理事务所(普通合伙) 45115 代理人: 黄建中
地址: 536000 广西壮*** 国省代码: 广西;45
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摘要:
搜索关键词: 羟基 甾醇类 单体 化合物 制备 方法 应用
【说明书】:

技术领域

发明涉及多羟基甾醇类单体化合物的制备方法,还涉及多羟基甾醇类单体化合物的应用,所述多羟基甾醇类单体化合物指的是从皱瘤海鞘中提取分离的单体成份,属于海洋天然产物化学领域。 

背景技术

自20世纪80年代以来,国际上一些天然产物研究人员已经从海鞘中发现了具有抗肿瘤、抗病毒活性的化合物并且很多进入临床研究,使海鞘成为除海绵和珊瑚之外,人类获取有显著药理活性物质的重要海洋生物资源。国内外有关海鞘营养成分的研究很多,如氨基酸、矿物质元素、脂肪酸和多糖等,对人体有相当大的益处,被称为“东北珍味”。皱瘤海鞘(Styela plicata)属于脊索动物门(phylum Chordata),尾索动物亚门(Tunicata),海鞘纲(Ascidiacea)。目前关于其生物活性物质的研究文献极少,国外研究人员早期从该种海鞘中发现具有药理活性的二萜和多肽类型的化合物,国内关于中国沿海皱瘤海鞘的研究也刚刚起步,苏镜娱等人研究发现甾醇和神经酰胺在其次级代谢产物中所占比例较大。迄今尚未见其化学成分抗卤虫活性的报道。 

发明内容

本发明的目的是提供从皱瘤海鞘中提取分离多羟基甾醇类单体化合物的方法和应用,以克服现有技术的不足。 

为实现上述目的,本发明采取了这样的技术措施:多羟基甾醇类单体化合物的制备方法,具体技术步骤如下: 

(1)取新鲜皱瘤海鞘,于组织捣碎机中匀浆,经95%乙醇超声波提取4次,每次30min,合并提取液,于旋转蒸发仪减压浓缩提取液至35℃时热测相对密度是1.1―1.4时得浸膏,以浸膏与水的质量比是1:1的比例,用水分散浸膏,分散之后用等量乙酸乙酯萃取,萃取液减压浓缩至35℃时热测相对密度是1.1―1.4时得到乙酸乙酯相浸膏; 

(2)将乙酸乙酯相浸膏用甲醇完全溶解,用Sephadax LH-20凝胶柱层析,甲醇洗脱,然后用RP-18反相硅胶柱层析,甲醇/水浓度分别是30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%进行梯度洗脱,最后用制备高效液相色谱,80%甲醇水洗脱,得到2个纯化合物,分别为化合物1和化合物2,对化合物的理化性质和波谱数据进行分析,并与文献对照,化合物1鉴定为:dendronesterol A,化合物2鉴定为:(20S,22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol,其结构式分别为: 

本发明提供了2个多羟基甾醇单体化合物的抗卤虫活性检测方法为:依照Solis改良法,取24孔培养板,每孔加1mL含卤虫幼体的溶液(每孔20个卤虫),各化合物设置50μg/mL,25μg/mL,10μg/mL三个终浓度,同时设置空白对照组(加处理过的海水1mL)和DMSO对照组(含与测试样品相当浓度的DMSO),每个浓度的样品设三个平行样,制成测试培养板,培养24h后,记录卤虫死亡个体数目。 

结果评定:校正死亡率%=[(DMSO对照组存活率-样品组存活率)/DMSO对照组存活率]×100%。 

依照上述方法检测化合物1和化合物2的抗卤虫活性,在浓度为50μg/mL时对卤虫的致死率分别为87.4%和82.9%,并且随着浓度的升高杀虫率也升高,表现出浓度依赖性,可用于制备抗虫药物的应用。 

采取上述措施的本发明,制备方法简单,成本低,对环境的污染小;得到的单体化合物为海洋药物的研究和开发提供基础资料。本发明分离纯化的化合物,dendronesterol A和(20S,22E,24R)-ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol,均对卤虫的活性良好。卤虫作为生物活性筛选的模型生物具有来源广泛、操作简单、所需化合物的量较少等优势,应用卤虫进行杀虫活性物质的筛选是一种成本低、效率高的方法,本发明的应用可以大大缩短新药创制的周期,对新药的研发具有重要意义。 

具体实施方式

实施例1 

制备方法: 

(1)取新鲜皱瘤海鞘湿重1.5kg,于组织捣碎机中匀浆,经95%乙醇超声波提取4次,每次30min,合并提取液,于旋转蒸发仪减压浓缩提取液至35℃时热测相对密度是1.1―1.4时得浸膏1.5g,以1500g水分散浸膏,分散之后用等量乙酸乙酯萃取,萃取液减压浓缩至35℃时热测相对密度是1.1―1.4时得到乙酸乙酯相浸膏700.0mg; 

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