[发明专利]一种检测纤维中蛋白质含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测纤维中蛋白质含量的方法，属于纺织材料检验技术领域。

背景技术

目前，纺织面料的组分越来越复杂，已经由原来的单、双组分向多组分发展。而纤维材料中的天然纤维的组成更加复杂，以棉为例，其主要组成物质是纤维素，此外还含有少量多缩戊糖、蜡质、蛋白质、脂肪、水溶性物质及灰分等伴生物。如何鉴别纤维种类及其各组分含量也是纤维检验的一项重要内容，纤维鉴别包括形态特征鉴别和理化性质鉴别。形态特征鉴别常用显微镜观察法。理化性质鉴别的方法很多，有燃烧法、溶解法、试剂着色法、熔点法、比重法、双折射法、X射线衍射法和红外吸收光谱法等。这些检测方法多是定性检测，缺乏定量检测方案。众所周知，定量检测更加有利于了解纤维中各组分的含量，有助于提高分析工作的精确度。因此，应该加强纤维检验技术领域中定量检测方案的制定。

在纤维中蛋白质含量的检验技术领域，仍然停留在定性检测阶段，即测试该面料是否含蛋白质纤维，而不是测试是否含蛋白质或蛋白质含量是多少。关于纤维中蛋白质含量的测定，目前仅有少数学者使用了凯氏定氮法，该方法与双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法是蛋白质含量测定方法中常用的四种古老的经典方法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定方法，即考马斯亮蓝法(Bradford法)，其属于分光光度法。考马斯亮蓝法是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。考马斯亮蓝G-250是一种有机染料，在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中与蛋白质的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合后变成蓝色，其最大吸收波长从465nm变成595nm，蛋白质在1～1000μg范围内，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，符合朗伯比尔定律，故可用于纤维中蛋白质的定量测定。

由于蛋白质含量测定的四种经典方法各有其缺点，尤其对纤维检测适用性不强，因此选用干扰少、灵敏度高、显色快、操作简便的考马斯亮蓝法更加适合纤维中蛋白质含量的检测。该方法不仅能够定量检测，也可以通过其显色反应进行定性检测，从而对纤维分析工作提供更准确的数据，对完善纺织纤维的检测技术具有十分重要的意义。关于考马斯亮蓝法在纺织纤维检验中的应用，目前尚未见有所报道。

发明内容

本发明旨在提供一种检测纤维中蛋白质含量的方法。

本发明中检测方法所采用的技术方案：

步骤1：蛋白质标准溶液的制备。

精确称取牛血清白蛋白100.00mg，用少量蒸馏水溶解定容至1000mL，即为100μg/mL蛋白质标准储备液，或用其他稀释算法得到100μg/mL蛋白质标准储备液，冰箱中4～5℃保存。

步骤2：考马斯亮蓝G-250溶液的制备。

取一定量考马斯亮蓝G-250在研钵中进一步研磨后，精密称取考马斯亮蓝G-250 100.00mg，加入95％乙醇50mL，再加入100mL 85％(W/V)磷酸，用蒸馏水稀释定容至1000mL。置于棕色瓶中备用，常温下放置一个月后不能再使用。

步骤3：标准曲线的绘制。

①分别精密吸取标准蛋白溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于6个10mL具塞试管中，方案如表1所示，各管加蒸馏水至1.0mL，再分别加入考马斯亮蓝G-250溶液5mL，混匀，放置10min，使用分光光度计于波长595nm下立即测定吸光度。

表1标准曲线测定溶液配制方案