[发明专利]一种阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种杂质的检测方法，特别涉及一种阿扎胞苷中四乙酰核糖的检测方法。 

背景技术

阿扎胞苷，英文名称Azacitidine，化学名为1-(β-D-呋喃核糖基)-4-氨基-1,3,5-三嗪-2(1H)-酮，又名5-氮杂胞苷，其结构式如下： 

阿扎胞苷为胞嘧啶核苷类药物。能直接掺入DNA中，抑制DNA和RNA合成，可杀伤处于S期的细胞。美国FDA最早于2004年5月批准Celgene corp上市该药，商品名为:Vidaza，主要用于治疗骨髓增生异常综合症，急性非淋巴细胞性白血病。 

四乙酰核糖是合成阿扎胞苷常用的原料之一，在合成的阿扎胞苷中可能存在四乙酰核糖杂质。杂质检测是控制药品质量的重要指标之一。药物纯度对病人的影响是非常大的。注射药物不纯是引起药物不良反应(如过敏、药物热等)的主要原因。口服药物不纯，可能增加不良反应的发生率，如恶心、呕吐、腹痛、腹泻等。同时，可能影响的是药物的吸收，从而影响药物疗效。因此，药物杂质的检测方法就显的尤为重要。 

目前，美国药典36版(USP36)所记载的阿扎胞苷原料中杂质的检测方法， 采用高效液相色谱法，采用流动相为1.54g/L乙酸铵水溶液和乙腈，进行梯度洗脱，柱温为10℃，洗脱时间为82min，检测波长为242nm。该方法不能用于检测阿扎胞苷中四乙酰核糖，即使选用四乙酰核糖的最大吸收波长210nm为检测波长，其它条件不改变，也不能检测出阿扎胞苷中的四乙酰核糖。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述不足，提供一种阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的检测方法，该方法能检测出阿扎胞苷中四乙酰核糖，具有灵敏度高，准确度高，杂质峰形对称性好，柱效高的优点。 

为了达到上述目的，具体技术方案如下： 

一种阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的检测方法，采用高效液相色谱法，选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以水-甲醇为流动相进行等度洗脱，流速为0.8-1.2mL/min，柱温25-35℃，样品的检测波长为205nm到215nm； 

USP36中选用柱温为10℃，温度偏低，导致柱压偏高，会降低色谱柱的使用寿命，同时不易控制。本发明选用的柱温是25℃-35℃，温度接近室温，柱压低，容易控制。四乙酰核糖在205nm-215nm具有很好的吸收。 

所述的流动相进行等度洗脱，其中，甲醇的体积百分比为30-45％。本发明选用的流动相条件，洗脱时间短，杂质峰和主峰充分分离。如果只选用水作为流动相，检测时间会很长；如果只选用甲醇作为流动相，杂质峰与主峰无法分离。 

优选的，阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的检测方法，采用高效液相色谱法，选用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以水-甲醇为流动相进行等度洗脱，流速为1.0mL/min，柱温30℃，样品的检测波长为210nm；四乙酰核糖的最大吸收波长为210nm，选用最大吸收波长进行检测，有利于提高检测结果的准确度。 

优选的，所述的流动相进行等度洗脱，其中，甲醇的体积百分比为35％。该条件下洗脱，10min就能出杂质峰，并且杂质峰和主峰分离效果好。 

所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱填料的颗粒度为5μm，规格为150mm×4.6mm。 

所述的阿扎胞苷原料中四乙酰核糖的检测方法，洗脱时间为20min。USP36中杂质检测方法，洗脱时间为82min。本发明中的洗脱时间只需要20min。节省时间的同时，具有很好的杂质四乙酰核糖检测效果。 

所述的样品为0.5-10mg/mL的阿扎胞苷水溶液。 

量取所述的阿扎胞苷水溶液50μL，进行测定。 

与现有技术相比，本发明的有益效果： 

(1)本发明中的检测方法可以用于准确检测阿扎胞苷中杂质四乙酰核糖。 

(2)本发明中的流动相为常用溶剂，同时采用等度洗脱，方法简单易操作。洗脱时间只需要20min，就能得到很好的检测结果，检测效率高。 

(3)采用本发明中的方法进行检测，分离度达到4以上，通常分离度大于2，杂质峰和主峰就能够很好分离，分离度越大，效果越好。拖尾因子接近1，峰形对称性好。理论塔板数大于5000，柱效高。 

附图说明：

图1为实施例1高效液相色谱图。 

图2为实施例3高效液相色谱图。 

图3为对比例1高效液相色谱图。 

具体实施方式