[发明专利]一种百日咳诊断试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于包括纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针、百日咳杆菌荚膜抗原、斑点金免疫集中渗滤装置，所述的集中渗滤装置由塑料小盒、点加了百日咳杆菌荚膜抗原的硝酸纤维素膜和吸水垫三部分组成。

2.如权利要求1所述的一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于：所述的用于浸泡检测探针的纳米金标记鼠抗人IgA抗体的浓度为0.92-1.86μg/mL。

3.如权利要求1所述的一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于：所述的百日咳杆菌荚膜抗原浓度为0.85～1.65μg/mL。

4.如权利要求1～3任意一项所述的一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于：所述的点加了百日咳杆菌荚膜抗原的硝酸纤维素膜采用如下方法制备得到：

(1)细菌分离培养：用马铃薯血液甘油琼脂培养基培养百日咳杆菌，5-7日后，停止培养，分离菌落；

(2)溶菌酶处理细菌悬液：在细菌细胞的悬液中加溶菌酶，27-35℃，保温15min，破碎细菌细胞；

(3)抗原提取：用氢作为溶剂，0.03-0.05mol/L的磷酸盐作为缓冲液，进行提取，温度控制在5℃以下，pH控制在5.0-7.0；

(4)抗原分离与纯化：用离子交换法进行分离，其中，所述交换剂为离子交换凝胶，优选DEAE-葡聚糖凝胶或CM-葡聚糖凝胶；

(5)抗原浓缩：采用冰冻法进行浓缩，先将步骤(4)制备的抗原冷却成固体，然后再缓慢溶解，不含抗原的纯冰晶浮于液面，抗原则集中于下层溶液中，移去上层冰块，再次用稀释液调节浓度至0.85～1.65μg/mL，即得抗原浓缩液，-20～-4℃保存；

(6)抗原包被硝酸纤维素膜：将硝酸纤维素膜上放入调节好浓度的百日咳杆菌荚膜抗原溶液中，静置20-30min，待硝酸纤维素膜充分吸附百日咳杆菌荚膜抗原，取出，低温保存备用。

5.如权利要求1～3任意一项所述的一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于：所述的纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针的制备方法包括如下步骤：

(1)制备纳米金体系：王水浸泡容器，再经超纯水冲洗，烘干，加入质量浓度为1％的氯金酸，用超纯水溶解，所述氯金酸与超纯水之间的比例为：(97.5-98.8)：(3.85-4.05)，搅拌加热煮沸，加入质量浓度为1％的柠檬酸三钠，继续搅拌加热至形成酒红色溶液，搅拌冷却，得到纳米金溶液；(2)制备纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针:将上述纳米金溶液用碳酸钾溶液调节其pH至7.6-8.5，将鼠抗人IgA抗体稀释至0.3-0.75mg/ml，12000rpm、4℃条件下离心40min，得上清液，迅速滴加到纳米金溶液中，充分混匀结合，加入与前述混合液等体积的封闭液，室温继续孵育20～28min，14000rpm，4℃条件下离心15～25min，去除上清液，稀释液重悬沉淀并洗涤一次，得到纳米金标记鼠抗人IgA抗体的检测探针。

6.如权利要求1所述的一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于所述的塑料小盒可以是多种形状的，盒盖的中央有边长约0.5～0.8cm的正方形孔，盒底部有一位置与盒盖上的方孔对应的方形凹槽，大小与盒盖上的方孔一样大；吸水垫放置于盒的凹槽处，硝酸纤维素膜放在吸水垫与盒盖之间。

7.如权利要求6所述的一种百日咳诊断试剂盒，其特征在于所述的吸水层是由3-5层吸水垫叠放在一起组成的。