[发明专利]九节龙皂苷I在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及九节龙皂苷I在制备抗肿瘤药物中的应用。 

背景技术

九节龙皂苷 I(ardipusilloside I)是从九节龙中分离出三萜皂苷类成分，其分子式为C₅₃H₈₆O₂₂，分子量为1075.26，分子结构式： 

 

九节龙皂苷I易溶于水，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇等亲水性有机试剂，难溶于氯仿、乙酸乙酯、乙醚等。经研究发现其具有明显增强巨噬细胞的吞噬活力和增加SREC数目，显著抗肿瘤作用，有可能成为抗肿瘤药物的先导化合物，具有应用价值。

九节龙为紫金牛科紫金牛属植物，又叫毛茎紫金牛，具有祛风除湿，活血止痛，常用于治风湿疼痛，跌打肿痛，咳嗽吐血，寒气腹痛。九节龙药材中不仅含有黄酮，有机酸类和内酯物质，还含有皂苷类物质。 

通过文献检索， 国内尚未见九节龙皂苷I用于制备抗肿瘤药物。 

发明内容

为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗肿瘤疾病，应用九节龙皂苷I制备抗肿瘤药物。 

本发明的技术方案如下： 

本发明所述的九节龙皂苷I，其制备方法包括以下步骤：

（1）取九节龙全草粉碎，按固液体积比为5：1.5-2加入夹带剂，在压力22-35MPa，温度35-48℃条件下，通入液态CO₂萃取90-180min，在压力7-9MPa，温度30-35℃条件下解析，收集萃取液；

（2）将步骤（1）中得到的萃取液加硅藻土搅拌脱色，过滤得到脱色液；

（3）将步骤（2）中得到的脱色液浓缩至相对密度为1.12，上中性氧化铝柱，用石油醚-乙酸乙酯洗脱纯化，得到九节龙皂苷I粗品；

（4）粗品经过制备型高效液相色谱精制得到高纯度的九节龙皂苷I。

所述步骤（1）中，夹带剂为甲醇或乙醇溶液。 

所述步骤（2）中，硅藻土加入量为药材量的3-4.5% 

所述步骤（3）中，石油醚-乙酸乙酯的体积比为3:14。

所述步骤（4）中，制备型高效液相色谱流动相为甲醇-乙腈-水，体积比为19:38:45。 

九节龙皂苷I在制备抗肿瘤药物中的应用。 

通过体外肿瘤细胞体外抑制试验，观察九节龙皂苷I的抗肿瘤作用，结果表明九节龙皂苷I对腹水型S180、肝癌及黑色素瘤B16均有一定的抑制作用，具有显著抗癌活性，且其毒副作用小。 

本发明的有益效果通过以下实验得到了验证： 

实验方法：

1、受试提取物：九节龙皂苷I提取物

（1）性状：针晶，味苦。

（2）规格：含九节龙皂苷I≥90%。 

（3）溶剂：乙醇或甲醇。 

（4）储存条件：4℃，密封保存。 

2、细胞株：腹水瘤细胞株S180、肝癌细胞株BEL-7404及黑色素瘤细胞株B16。 

3、给药剂量和方法 

九节龙皂苷I组：10mg/kg/天，灌胃给药，隔一天一次，共五天。

阴性对照组：10mg/kg/天，生理盐水肌注给药，隔一天一次，共五天。 

阳性对照组：30mg/kg/天，5-氟尿嘧啶肌注给药，隔一天一次，共五天。 

灌胃后2h，用HPLC检测血浆药物浓度。 

4、种植瘤模型的建立与给药 

（1）皮下种植：分别将上述细胞培养至90%融合，收集细胞，取2×10 ⁶细胞悬液，注射至小鼠肋下皮下组织，于术后15天取材，称量瘤重。另取同样模型，观察30天，计算药物对模型动物存活率的影响。

（2）脾内种植瘤肝转移模型：取2×10 ⁶细胞悬液注射至小鼠脾包膜内，于术后15天取脾和肝脏，测量瘤重和肝转移数。 

（3）给药方式：种植瘤细胞同时给药。 

5、结果 

结果如表1、表2和表3显示，九节龙皂苷I组用药均有不同程度的抑制肿瘤生长和转移的作用，可延长实验小鼠的生存期。