[发明专利]凝血因子Ⅷ质控品制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床凝血检验制剂的制备方法，具体凝血因子VIII质控品制备方法。 

背景技术

凝血因子VIII促凝活性测定适用于血友病A患者确诊、血友病治疗效果评估、其他出凝血疾病鉴别诊断以及各大采供血机构、血液制品厂凝血因子VIII浓缩制剂质量评价。用于凝血因子VIII促凝活性检测的试剂、仪器较多，不同的试剂和检测仪器、检测原理各不相同，使用凝血因子VIII质控品对凝血因子VIII检验进行室内、室间质量控制非常重要。 

目前临床实验室使用的凝血质控物为多参数凝血质控品，其异常值凝血质控品包括凝血因子VIII在内的多个凝血因子均为异常水平，与病理样本不同可能影响凝血因子VIII测定结果的准确性。 

国内凝血质控品几乎被国外试剂垄断，产品价格昂贵且水平单一，无法满足临床检验多活性水平的需求，因此，研发生产国内自主品牌的多个浓度水平的凝血因子VIII质控品有重大意义。 

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种制备凝血因子VIII质控品的方法及获得凝血因子VIII质控品。本发明方法制备的凝血因子VIII质控品为凝血因子VIII多个浓度水平，且其它凝血因子含量在正常范围；该产品均一性和稳定性较好，满足临床对凝血因子VIII质控品的质量控制要求，可以更准确地监测病理样本检测结果的准确性。 

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：凝血因子VIII质控品制备方法，包括以下步骤： 

(1)将人静脉采集的血液与抗凝剂以体积比为9∶1加入混合，在2℃～8℃条件下离心15分钟，转速2500rpm，分离吸取上层血浆，将多人份分离后的上层血浆混合，即得多人份混合血浆；抗凝剂为枸橼酸三钠溶液，其浓度为0.109mol/L。 

(2)每1000毫升多人份混合血浆中加入2～10克乙二胺四乙酸二钠；37℃温浴 1～2小时； 

(3)上述处理后血浆于透析液中2℃～8℃透析24小时，透析液为氯化钠5～10g/L、咪唑2～5g/L，pH7.2；透析液与血浆体积比为50～100∶1，12小时换透析液一次； 

(4)透析后的血浆在2℃～8℃条件下离心30分钟，转速2500rpm，得到缺乏凝血因子VIII血浆； 

(5)将缺乏凝血因子VIII血浆与多人份混合血浆按照要求比例混合，即可制备成不同浓度水平的凝血因子VIII质控品。 

(6)将制备的凝血因子VIII质控品加入冻干保护剂，分装，冷冻干燥。加入的冻干保护剂包括质量比例占凝血因子IX质控品的0.5～2％Hepes、1～5％甘氨酸、1～5％蔗糖。 

本发明制备的凝血因子VIII质控品，其产品均一性、稳定性及冻干品复融后稳定性好，可代替进口产品用于凝血因子VIII检测的质量控制，有利于降低检测成本，提高我国对凝血因子VIII检测的能力。 

具体实施方式

结合实施例，进一步阐述本发明： 

实施例以制备活性为30％的凝血因子VIII质控品为例。 

(1)将人静脉采集的血液与抗凝剂以体积比为9∶1加入混合，在2℃～8℃条件下离心15分钟，转速2500rpm，分离吸取上层血浆，将多人份血浆混合，即得多人份混合血浆；抗凝剂为枸橼酸三钠溶液，其浓度为0.109mol/L； 

(2)每1000毫升多人份混合血浆中加入2～10克乙二胺四乙酸二钠；37℃温浴1～2小时； 

(3)上述处理后血浆于透析液中2～8℃透析24小时，透析液为氯化钠5～10g/L、咪唑2～5g/L，pH7.2；透析液与血浆体积比为50～100∶1，12小时换透析液一次； 

(4)透析后的血浆在2℃～8℃条件下离心30分钟，转速2500rpm，得到缺乏凝血因子VIII血浆； 

(5)将缺乏凝血因子VIII血浆与多人份混合血浆按照要求比例混合，即可制备成不同浓度水平的凝血因子VIII质控品。 

(6)将制备的凝血因子VIII质控品加入冻干保护剂，分装，冷冻干燥。加入的 冻干保护剂包括1％Hepes、2％甘氨酸、2％蔗糖。 

产品性能检验测试： 

(1)产品活性检测 

使用Sysmex CA-1500全自动血凝仪及配套凝血因子VIII检测试剂对实施例凝血因子VIII缺乏血浆凝血因子活性进行检测。 

表1凝血因子VIII质控品的凝血因子活性测定表