[发明专利]一株能有效抑制罗非鱼源无乳链球菌的蜡样芽孢杆菌NY5

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高活力蜡样芽孢杆菌菌株NY5(Bacillus cereus)。

背景技术

罗非鱼(Tilapia)隶属于鲈形目、鲈形亚目、丽鱼科(Cichlidae)、罗非鱼属。由于罗非鱼具有杂食性、生长快、繁殖力强、适应性广等优点，目前已成为世界性主要养殖鱼类。我国是全球最大的罗非鱼生产国和加工出口国，2013年产量150万吨，加工出国量30多万吨，出口额10多亿美元。但自2009年以来，我国罗非鱼养殖中病害频繁爆发，损失巨大，严重影响了罗非鱼产业的可持续发展，其中最为严重的是链球菌病。该病具有传染性强，持续时间长，死亡率高等特点，成为目前罗非鱼病害防控的难题。

过量的亚硝酸盐氮对水生动物具有一定的毒害作用，因此，养殖水体亚硝酸盐氮的有效去除是水产业亟待解决的问题之一。

氧气的充足供应是集约化养殖的重要条件之一，而传统的反硝化细菌多数为厌氧菌，在目前的养殖环境下，其反硝化性能必定受到限制。

集约化水产养殖的水环境是一个特殊的生态系统，大量的饲料投入、饵料残留、动物排泄物等造成水体有机物浓度迅速升高，导致水体环境的恶化。而芽孢杆菌通常具有非常强的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶分泌能力，可迅速降解残饵、粪便等大分子物质，降低有机物累积的同时为其他微生物及藻类提供丰富的营养物质。

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)广泛存在于土壤等环境中，是一种好氧型的芽孢杆菌，可产生丰富的蛋白酶、淀粉酶及抑菌物质等。在水产中，将蜡样芽孢杆菌制成微生态制剂，可以克服使用抗生素所带来的副作用，如鱼体肠道微生态系统失调、免疫力下降、药物残留及产生抗药性等。蜡样芽孢杆菌能选择性促进生活在肠道的微生物的活性，同时抑制肠道内有害病菌的生长，降低宿主染病的机会。另外，蜡样芽孢杆菌在生长过程中还会产生有益的代谢产物，刺激和促进宿主的生长。

针对集约化养殖带来的养殖环境恶化，鱼类抵抗力下降，病害肆虐，滥用抗生素等问题，筛选出在好氧条件下既能有效的拮抗鱼源链球菌，又能高效降解亚硝酸盐氮、有机物的蜡样芽孢杆菌，为水产养殖提供新的可用的益生菌菌株。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种能有效抑制罗非鱼源链球菌的生长，能在有氧条件下高效降解亚硝酸盐氮、水解蛋白和淀粉的蜡样芽孢杆菌NY5。该菌株经过安全性检测，罗非鱼在蜡样芽孢杆菌NY5浓度为2×10⁷cfu/ml的水体中及在注射100μl浓度为2.1×10⁶cfu/ml的NY5菌液条件下，没有出现死亡及异常情况。该菌株为水产益生菌提供了有用的菌源，拓宽了对蜡样芽孢杆菌功能方面的应用，具有较强的应用价值。

本发明为解决上述技术问题所采取的技术方案为：蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)NY5，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.9372。

蜡样芽孢杆菌NY5的菌落形态为：扁平、无规则、圆形或近似圆形、质地软、无色素、稍有光泽的、呈白色(似蜡烛样颜色)，直径5～7mm；需氧，革兰氏阳性芽孢杆菌。最适生长pH值：5～9，最适生长温度：25-40℃，最适盐度：0-40。

与现有技术相比，本发明取得的有益效果是：该蜡样芽孢杆菌能够有效抑制罗非鱼源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的生长。经过反硝化性能培养基培养，结果表明能在12小时内去除水中的浓度为50mg/L亚硝酸盐氮，去除效率达到100％。其为好氧芽孢杆菌，可以水解酪蛋白、淀粉，经过安全性检测，发现罗非鱼在蜡样芽孢杆菌NY5浓度为2×10⁷cfu/ml的水体中及注射100μl为2.1×10⁶cfu/ml的NY5菌液，没有出现死亡及异常情况。本发明提供了在有氧条件下高效降解亚硝酸盐氮、水解蛋白和淀粉，并能有效抑制罗非鱼源无乳链球菌的有用菌源，拓宽了对蜡样芽孢杆菌功能方面的应用，具有较强的应用价值。

附图说明

图1是蜡样芽孢杆菌NY5的16S rRNA基因序列的NJ系统进化树图。

图2是胞外淀粉酶检测结果图。

图3是蛋白酶检测结果图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的描述，当然下述实施例不应理解为对本发明的限制。

一、蜡样芽孢杆菌NY5的筛选

(一)材料