[发明专利]无内源性基因组DNA的TaqDNA聚合酶的制备方法

权利要求书

1.一种无内源性基因组DNA的Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于：所述方法包括Taq DNA聚合酶蛋白的表达、细胞的破碎、宿主细胞内源性基因组DNA的去除及Taq DNA聚合酶的制备。

2.根据权利要求1所述的一种无内源性基因组DNA的Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于：Taq DNA聚合酶蛋白的表达：挑取含Taq DNA聚合酶基因的E.coli菌株到4ml LB培养基中；37℃，200rpm摇床过夜培养，取0.1ml此培养物到500ml液体LB培养基中，37℃，200rpm震荡培养约6.5小时，加人异丙基硫代半乳糖苷至终浓度为125 mg/L，诱导14 小时；所述LB培养基含有氨苄西林抗生素80mg/L。

3. 根据权利要求1所述的一种无内源性基因组DNA的Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于：细胞的破碎：将培养后的菌液用离心机离心收集菌体，5000 rpm/min 离心10 min收集菌体，加入30ml start buffer，超声波细胞粉碎机破碎细胞，程序如下：破碎总时间为300秒，功率为35%，每破碎6秒钟后停止9秒钟；细胞破碎结束后，11000rpm/min 离心10 min收集上清。

4.根据权利要求3所述的一种无内源性基因组DNA的Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于：所述start buffer溶液的配置：pH8.0、20 mM Tris-HCl。

5.根据权利要求1所述的一种无内源性基因组DNA的Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于：宿主细胞内源性基因组DNA的去除及Taq DNA聚合酶的制备：本次实验主要采用AKTA蛋纯化仪纯化DNA聚合酶；所有溶液必须采用双蒸水配置，并用0.45 μm的滤膜过滤，配好的溶液应存储在4°C冰箱中；将HiTrap Q FF阴离子交换柱装到AKTA蛋纯化仪上后用20ml start buffer 平衡阴离子交换柱，用AKTA蛋纯化仪的泵A上样，上样结束后用buffer A洗掉与阴离子交换柱装结合能力较弱的蛋白，再用Buffer B 将Taq DNA聚合酶蛋白洗脱下来，最后用Buffer C洗掉与阴离子交换柱装结合能力较强的蛋白。

6.根据权利要求5所述的一种无内源性基因组DNA的Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于：所述Buffer A溶液的配置：pH8.0、20 mM Tris-HCl, 0.15 mM NaCl ；Buffer B 溶液的配置：pH8.0、20 mM Tris-HCl, 0.25 mM NaCl ；Buffer C 溶液的配置：pH8.0、20 mM Tris-HCl, 1M NaCl。