[发明专利]一种甜叶菊种质组培苗的保存方法

说明书

技术领域

一种甜叶菊种质组培苗的保存方法，涉及甜叶菊组织培养技术领域，更具体的说是一种利用组织培养技术延长甜叶菊种质保存时间的方法。

背景技术

甜叶菊种质的组织培养是进行快繁提供生产上用苗和进行室内科学研究工作的基础，由于快繁生产和科学研究都有一定的阶段性，其间不可避免地会有一定时间的停滞阶段。甜叶菊组培苗生长较快，生根苗一般1个月长满瓶，增殖苗2个月长满瓶，这就要对其进行继代培养，否则就会逐渐死亡，导致种质材料丢失。

中国专利公布号为CN103609448A的发明专利公开了一种甜叶菊种质保存方法，利用此方法能显著延长种质保存时间，节省继代培养保存所需人力物力。其不足之处是，夏季室外环境温度较高，培养箱长期低温工作容易造成压塑机的损坏，箱内恒定低温难以保持；另外，培养箱中10-15℃低温培养也需增加电力的消耗，这是一些亟待解决的问题。

本发明通过提高培养基中蔗糖的含量和添加生长抑制剂甘露醇可以解决上述问题，达到正常组培室温度条件下长期保存种质组培苗的目的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在正常组织培养温度下进行甜叶菊种质组培苗保存的方法，以减少甜叶菊种质保存继代次数和培养保存的成本。

本发明是这样实现的：

一种甜叶菊种质保存方法包括以下技术环节：

①培养基配方：MS培养基中加入60 g/L蔗糖、20 g/L生长延缓剂甘露醇、5 g/L琼脂和生长激素6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L；

②培养基分装：按上述配方将配置好的培养基分装入250ml的组织培养瓶中进行高压灭菌，每升分装为24瓶；

③接种：在超净工作台上用剪刀将甜叶菊种质组培苗剪为±0.5 cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的培养瓶中，每瓶接种4个茎段；

④培养条件：将接种好的组培瓶放入组培室中培养，培养温度25±1℃，光照强度1000-1500 lx，光照时间12h/d；

本发明的有益效果：

本发明通过向培养基中加入生长抑制剂甘露醇和增加培养基中蔗糖的加入量，有效地延缓甜叶菊种苗在正常组培室温度下的生长速度，解决长期低温培养对培养箱压塑机的损坏及温度难以控制的难题，同时也减少了种质保存继代的次数，大大节省了继代保存所需的成本。

附图说明

图 1 为蔗糖30g/L、不加生长抑制剂甜叶菊种质组培苗生长1个月的示意图；

图 2 为蔗糖60g/L、加生长抑制剂甘露醇甜叶菊种质组培苗生长5个月的示意图。

具体实施方式：

一种甜叶菊种质保存方法：

①培养基配方：MS培养基中加入60 g/L蔗糖、20 g/L生长延缓剂甘露醇、5 g/L琼脂和生长激素6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L；

②培养基分装：按上述配方将配置好的培养基分装入250ml的组织培养瓶中进行高压灭菌，每升分装为24瓶；

③接种：在超净工作台上用剪刀将甜叶菊种质组培苗剪为±0.5 cm长短的茎段，用镊子将茎段接种到盛有培养基的培养瓶中，每瓶接种4个茎段；

④培养条件：将接种好的组培瓶放入组培室中培养，培养温度25±1℃，光照强度1000-1500 lx，光照时间12h/d；

试验情况：

试验于2012年3月27日在安徽科技学院组培室进行。按照上述配方及操作方法接种甜叶菊组培苗的茎段，以不加生长抑制剂甘露醇

、加入30g/L蔗糖的MS培养基为对照；每处理接种12瓶，每瓶接种4株。

生长调查：从表1可知，本发明向培养基中加入甘露醇、提高蔗糖浓度能有效地抑制甜叶菊种质组培苗的生长，从接种生长到苗开始死亡和全部死亡的时间都明显长于对照，延长了甜叶菊种质组培苗的保存时间，减少了继代保存的次数。

表1 对照和处理组培苗的生长情况