[发明专利]一种快速筛选多倍体植物目的基因克隆产物的引物、方法

权利要求书

1.一种快速筛选菊花目的基因克隆产物的引物，其特征在于：

包括5’RACE反向扩增的引物，该引物包括反转录引物、特异性扩增引物、正、反向检测引物和接头引物，引物长度分别为16-30 bp，Tm 55-65℃，正向和反向检测引物相距100-200 bp，检测引物在特异性扩增引物之一GSP5’-3上游；

反转录引物为：

GSP5’-1：如SEQ ID NO.5所示；

特异性扩增引物为：

GSP5’-2：如SEQ ID NO.6所示

GSP5’-3：如SEQ ID NO.7所示；

检测引物为：

5’RACE JC-F：如SEQ ID NO.3所示

5’RACE JC-R：如SEQ ID NO.4所示；

接头引物为：

AAP序列：GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG；

AUAP序列：GGCCACGCGTCGACTAGTAC；

包括3’RACE正向扩增的引物，该引物包括特异性扩增引物、正、反向检测引物和接头引物，引物长度分别为16-30 bp，Tm 55-65℃，正向和反向检测引物相距100-200 bp，检测引物在特异性扩增引物之一GSP3’-3下游；

特异扩增引物为：

GSP3’-1：如SEQ ID NO.8所示

GSP3’-2：如SEQ ID NO.9所示

GSP3’-3：如SEQ ID NO.10所示；

检测引物为：

3’RACE JC-F：如SEQ ID NO.11所示

3’RACE JC-R：如SEQ ID NO.12所示；

接头引物为：

AP：CTGATCTAGAGGTACCGGATCC；

dT-AP序列：CTGATCTAGAGGTACCGGATCCTTTTTTTTTTTTTTTT；

包括中间片段进行扩增时的引物，该引物包括特异性扩增引物和正、反向检测引物，引物长度分别为16-30 bp，Tm 55-65℃，正向和反向检测引物相距100-200 bp，正向检测引物在正向特异扩增引物的下游，反向检测引物在反向特异扩增引物的上游，正向特异性扩增引物与正向检测引物相距50-100 bp，反向特异性扩增引物与反向检测引物相距50-100bp；

特异扩增引物为：

中间GSP-F：如SEQ ID NO.13所示

中间GSP-R：如SEQ ID NO.14所示；

检测引物为：

中间JC-F：如SEQ ID NO.15所示

中间JC-R：如SEQ ID NO.16所示。

2.一种快速筛选菊花目的基因克隆产物的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）引物设计：该引物为权利要求1所述的引物；

（2）基因克隆扩增：提取菊花植物叶片RNA，进行反转录得到cDNA，用预先设计好的特异性扩增引物和接头引物或者特异性扩增引物进行基因扩增，然后用琼脂糖凝胶电泳进行片段大小选择，切胶回收，利用AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒回收PCR凝胶产物；

（3）检测引物筛选基因克隆产物：将步骤2）回收的PCR产物利用设计好的检测引物再次进行PCR扩增，然后用琼脂糖凝胶电泳进行片段大小选择；

选择结果如下：当基因克隆产物为非特异性片段时，步骤2）中PCR凝胶产物经过步骤3）后不能跑出电泳条带；基因克隆产物为特异性片段时，步骤2）中的PCR凝胶产物经过步骤3）后能跑出大小为100-200 bp的条带。

3.权利要求1所述引物在快速筛选菊花目的基因克隆产物试剂盒中的应用。

4.一种快速筛选菊花目的基因克隆产物的试剂盒，其特征在于包括权利要求1所述的引物。