[发明专利]用于金黄色葡萄球菌耐药性检测的组合物

权利要求书

1.用于金黄色葡萄球菌耐药性检测的组合物，包括用于PCR扩增的引物-探针组，所述引物-探针组包括：

SEQ ID NO.1/2及SEQ ID NO.3；以及，

下述引物-探针组中的至少一组：

SEQ ID NO.4/5及SEQ ID NO.6；

SEQ ID NO.7/8及SEQ ID NO.9；

SEQ ID NO.10/11及SEQ ID NO.12；

SEQ ID NO.13/14及SEQ ID NO.15；

SEQ ID NO.16/17及SEQ ID NO.18。

2.权利要求1所述的组合物，包括下述引物-探针组：

Nuc引物对SEQ ID NO.1/2及探针SEQ ID NO.3；

mecA引物对SEQ ID NO.4/5及探针SEQ ID NO.6；

erm A引物对SEQ ID NO.7/8及探针SEQ ID NO.9；

erm C引物对SEQ ID NO.10/11及探针SEQ ID NO.12；

aph(3′)-Ⅲa引物对SEQ ID NO.13/14及探针SEQ ID NO.15；

aacA-aphD引物对SEQ ID NO.16/17及探针SEQ ID NO.18。

3.用于金黄色葡萄球菌耐药性检测的试剂盒，包括权利要求1或2所述的组合物。

4.金黄色葡萄球菌耐药性检测方法，其特征在于，所述方法包括实时荧光PCR反应的步骤，使用如权利要求1或2所述的组合物。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述实时荧光PCR反应体系为：反应体系总体积25μL，其中含有：权利要求1所述的引物对各0.2μM及相应探针各0.4μM，以及：

浓度为10～100μg/mL的样品DNA 2μL，5U/μL Taq DNA聚合酶0.5μL，10μmol/L dNTP1μL，10×PCR缓冲液2.5μL，以及余量的水。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的实时荧光PCR反应参数为：95℃，30s，1个循环；95℃，5s；60℃，34s，40个循环。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述实时荧光PCR反应设阳性对照，阴性对照和空白对照；

所述阳性对照样品包括金黄色葡萄球菌的DNA提取物，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的DNA提取物，耐红霉素金黄色葡萄球菌的DNA提取物及耐氨基糖苷类抗生素的金黄色葡萄球菌的DNA提取物；

所述阴性对照样品是大肠杆菌的DNA提取物；

所述空白样品对照是灭菌水；

结果采用如下的结果判定标准：

a.质量控制：当以下条件有一条不满足时，实验视为无效：

(a)空白对照：无荧光对数增长，相应的Ct值＞40.0；

(b)阴性对照：无荧光对数增长，相应的Ct值＞40.0；

(c)阳性对照：有荧光对数增长，且荧光通道出现典型的扩增曲线，相应的Ct值＜30.0；

(d)内参照：有荧光对数增长，且荧光通道出现典型的扩增曲线，相应的Ct值＜30.0

b.结果判定：设置40个循环，Ct值即为循环数，

如果Ct值≤35.0，表明样品在经过35个循环以内的扩增，即检测到扩增曲线，则判定为被检样品阳性；

如Ct值≥40.0，表明样品经过40个循环扩增，仍没有扩增曲线，则判定为被检样品阴性；

如35.0＜Ct值＜40.0，在此之间结果为可疑结果，则重复一次；如再次扩增后Ct值仍为＜40.0，则判定被检样品阳性；如再次扩增后Ct值≥40.0，则判定被检样品阴性。