[发明专利]鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤(1)，发酵液样品采集和制备：

1)菌种活化

取平板上的单菌落划线接种于活化斜面，36-38℃恒温静置培养12-14h；

2)种子培养

接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有种子培养基的摇瓶中，纱布封口，置于往复式摇床上，36-37℃振荡培养12-18h，得到种子液；

3)鸟苷发酵

将上述种子液以10％的接种量接入装有发酵培养基的三角瓶中，置于往复式摇床上或发酵罐中，36-37℃，培养72h，获得发酵液；

4)采集

将10批次的鸟苷发酵每隔9h从三个平行样品中分别采集3份发酵液样品，其中0-27h所采样品为发酵前期样品、27-45h的样品为发酵中期样品，45-72h的样品为发酵后期样品；

步骤(2)，发酵液鸟苷含量的测定：

发酵液中鸟苷含量采用常用的高效液相色谱法定量测定；

步骤(3)，光谱采集：

利用红外光谱仪采集光谱，以空气为参比，对步骤(1)得到的发酵前、中、后期样品的发酵液分别重复扫描次数5次，取平均光谱；

步骤(4)，鸟苷发酵液红外吸收特征峰位置的确定：

利用纯水、鸟苷标准品及发酵上层清液为对照，确定发酵液红外特征峰的位置；

步骤(5)，鸟苷发酵前、中、后期指纹图谱的构建：

以鸟苷发酵液特征峰为主要研究对象，根据步骤(2)测定的发酵液中的鸟苷含量，研究鸟苷发酵前、中、后期红外吸收图谱特征，构建指纹图谱；

步骤(6)，指纹图谱的验证：

10批次摇床及5批次发酵罐验证指纹图谱可靠性；

所述的红外光谱的波长范围为4000-600cm^-1；

所述的发酵罐发酵的温度为36℃，pH6.5，溶氧30-40％；

所述的红外光谱仪为德国BRUKER Tensor 27红外光谱仪。

2.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于步骤(1)中所述的种子培养时，接两环生长良好的活化斜面菌种放入装有15mL种子培养基的250mL摇瓶中。

3.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于步骤(1)中种子培养时，纱布封口的纱布层数为8层。

4.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于步骤(1)中种子培养和鸟苷发酵时，往复式摇床的冲程76mm，速度为108r/min。

5.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于步骤(1)中鸟苷发酵时，将上述种子液以10％的接种量接入装有20ml发酵培养基的500ml三角瓶中。

6.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于步骤(1)中10批次为往复式摇床和发酵罐发酵各5批。

7.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于所述的发酵罐发酵的发酵罐为10L，转速600转/分，填料系数0.7。

8.根据权利要求1所述的鸟苷发酵过程红外指纹图谱的构建方法，其特征在于所述的鸟苷发酵每隔9h从三个平行样品中分别采集1ml的3份发酵液样品。