[发明专利]一种用于检测白色念珠菌的噬菌体复合纳米线

权利要求书

1.一种用于检测Sap2抗体的噬菌体复合纳米线，由噬菌体和磁性纳米颗粒组成；所述噬菌体展示有Sap2蛋白表位多肽和磁性纳米颗粒结合多肽，所述Sap2蛋白表位多肽的氨基酸序列如序列表中序列1所示，所述磁性纳米颗粒结合多肽的氨基酸序列如序列表中序列2所示；所述磁性纳米颗粒的粒径为10nm；

所述噬菌体复合纳米线中，每个所述噬菌体的表面结合29-39个所述磁性纳米颗粒；

所述噬菌体是按照包括如下步骤的方法制备得到的：

（a1）将所述Sap2蛋白表位多肽的编码基因插入到序列5所示的噬菌体载体的两个酶切位点Bgl Ⅰ之间，得到重组载体；将所述磁性纳米颗粒结合多肽的编码基因插入到所述重组载体的酶切位点PstⅠ和Hind Ⅲ之间，得到重组噬菌体载体；

（a2）将所述重组噬菌体载体转化大肠杆菌，得到重组菌；

（a3）培养所述重组菌，从而获得展示有所述Sap2蛋白表位多肽和所述磁性纳米颗粒结合多肽的噬菌体；

制备所述的噬菌体复合纳米线的方法，包括如下步骤：

（1）按照上述步骤（a1）-（a3），制备得到展示有所述Sap2蛋白表位多肽和所述磁性纳米颗粒结合多肽的噬菌体；

（2）将所述磁性纳米颗粒与所述噬菌体按照100μg ：4.8×10¹¹pfu比例于20-25℃共同孵育3 h，得到所述噬菌体复合纳米线。

2.根据权利要求1所述的噬菌体复合纳米线，其特征在于：所述Sap2蛋白表位多肽的编码基因为序列表中序列3所示的DNA分子；所述磁性纳米颗粒结合多肽的编码基因为序列表中序列4所示的DNA分子。

3.一种用于检测哺乳动物离体血清中Sap2抗体的试剂盒，含有权利要求1或2中任一所述的噬菌体复合纳米线、洗脱液、终止液和抗所述哺乳动物的IgG酶标二抗。

4.一种用于检测或辅助检测哺乳动物是否被白色念珠菌感染的试剂盒，含有权利要求1或2所述的噬菌体复合纳米线、洗脱液、终止液和抗所述哺乳动物的IgG酶标二抗。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还含有记载有如下内容的说明书：

（I）取待测哺乳动物的离体血清，将所述噬菌体复合纳米线置于所述血清中孵育1h，所述噬菌体复合纳米线与所述血清中的Sap2抗体形成复合物；

（II）利用磁铁富集所述复合物；

（III）用洗涤液对被富集的所述复合物进行洗涤，加入所述洗脱液静置10min，加入所述终止液，用磁铁吸附固定所述磁性纳米颗粒，所述Sap2抗体存在于澄清液中；

（IV）采用抗所述哺乳动物的IgG酶标二抗对所述澄清液中的所述Sap2抗体进行ELISA检测，测得OD450，记为OD450_实验组；

（V）以未感染白色念珠菌的健康的所述哺乳动物的离体血清替代所述待测哺乳动物的离体血清，按照步骤（I）-（IV）进行操作，测得的OD450记为OD450_对照组；

（VI）按照如下确定所述待测哺乳动物是否被白色念珠菌感染：若OD450_实验组大于OD450_对照组的2倍，则所述待测哺乳动物被白色念珠菌感染或候选被白色念珠菌感染；若OD450_实验组不大于OD450_对照组的2倍，则所述待测哺乳动物未被白色念珠菌感染或候选未被白色念珠菌感染。