[发明专利]一种三环系倍半萜类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及微生物代谢产物技术，具体的说是一种三环系倍半萜类化合物及其制备方法和用途。 

背景技术

柑橘炭疽病害菌Colletotrichum gloeosprioides是导致多种水果和蔬菜(如芒果、木瓜、柑橘、苹果和西红柿等)感染炭疽病腐烂的主要农业病原菌。炭疽病严重影响了水果的保藏和运输，对农业造成了严重的经济损失。杀菌剂是用来防治炭疽病的主要手段之一，但随着一些杀菌剂的反复使用，农业病害菌对其抗药性也越来越明显。因此，需要发展更多新的抗农业病害菌的药物。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种三环系倍半萜类化合物及其制备方法和用途。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种青霉菌株，解磷青霉菌株(Penicillium bilaiae)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年8月25日，保藏号为：CGMCC 9542。 

一种三环系倍半萜类化合物，结构式分别为式I所示的化合物1或化合物2，具有5-6-6三环系化学结构； 

三环系倍半萜类化合物的制备方法，： 

1)将解磷青霉Penicillium bilaiae经发酵培养，而后将发酵液用乙酸乙酯萃取3-4次，合并提取液进行浓缩，获得发酵液粗提物及菌丝体； 

菌丝体用丙酮-水(80-20)超声破碎提取3-4次，合并提取液后旋蒸除去丙酮，然后用乙酸乙酯萃取3-4次，合并萃取液再进行浓缩，获得菌丝体粗提物； 

所述解磷青霉(Penicillium bilaiae)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年8月25日，保藏号为：CGMCC 9542；保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号； 

2)将步骤1)中的发酵液粗提物和菌丝体粗提物合并后，进行减压硅胶柱层析，采用的洗脱液依次是梯度为20:1至1:1(v/v)的石油醚-乙酸乙酯和梯度为20:1至5:1(v/v)的氯仿-甲醇； 

3)将步骤2)中以石油醚-乙酸乙酯5:1(v/v)梯度洗脱下的组分以甲醇-水(甲醇-水的比例)作为洗脱液进行反相柱层析，收集甲醇-水50：50(v/v)洗脱得到的组分，经甲醇凝胶柱层析纯化后，再用硅胶柱层析纯化，硅胶柱层析纯化的洗脱液是梯度为100:1至30:1(v/v)的氯仿-甲醇，即得纯化目标化合物1； 

4)将步骤2)中以石油醚-乙酸乙酯10:1(v/v)梯度洗脱下的组分以甲醇-水(甲醇-水的比例)作为洗脱液进行反相柱层析，收集甲醇-水40：60(v/v)洗脱得到的组分，经甲醇凝胶柱层析纯化后，再用硅胶柱层析纯化，硅胶柱层析纯化的洗脱液是梯度为150:1至80:1(v/v)的氯仿-丙酮，即得纯化目标化合物2。 

一种三环系倍半萜类化合物的应用，所述式I所示的化合物用于制备抑制农业病害真菌的药物。 

所述式I所示的化合物用于制备抑制农业病害真菌的抑制剂或杀菌剂。 

所述式I所示的化合物用于制备抑制农业病害真菌柑橘炭疽病菌Colletotrichum gloeosprioides的药物。 

本发明由解磷青霉(Penicillium bilaiae)制备5-6-6三环系倍半萜类化合物的方法及该类化合物在制备农业病害菌抑制剂或杀菌剂中的用途。 

本发明采用最小抑菌浓度(MIC)法测试化合物1和2对10株致病菌：包括3株细菌，分别是金黄色葡萄球菌(S.aureus)、大肠杆菌(E.coli)和藤黄微球菌(M.luteus)，3株海洋弧菌，分别是嗜水气单胞菌(A.hydrophilia)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)和哈氏弧菌(V.harveyi.)以及4株农业病害菌，分别是白菜黑斑病菌(A.brassicae)、小麦赤霉病菌(F.graminearum)、柑橘炭疽病菌(C.gloeosprioides)和小麦全蚀病菌(G.graminis)的抗菌活性，试验证明，化合物1和2对柑橘炭疽病菌具有选择性抑制作用。 

本发明的5-6-6三环系倍半萜类化合物1和2可用作农业病害菌抑制剂或杀菌剂。同时，化合物1和2可以制成抗农业病害真菌的药物用于炭疽病的治疗。化合物1和2可溶于二甲亚砜或二甲亚砜的含水溶液加以利用。 

本发明所具有的优点：