[发明专利]一种脱细胞真皮基质及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种脱细胞真皮基质，其中，所述脱细胞真皮基质由真皮乳头层制备获得，并且所述脱细胞真皮基质的厚度为100～800μm；

优选地，所述脱细胞真皮基质的规格为0.5cm×0.5cm～2cm×2cm，优选为1cm×1cm；

优选地，所述脱细胞真皮基质来自人皮肤，更优选地，为尸体皮肤。

2.一种根据权利要求1的脱细胞真皮基质的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1)取皮，取包括表皮层和真皮层的断层皮肤；

优选地，所述断层皮肤从尸体中获得；

2)将步骤1)获得的断层皮肤处理为冻干片，然后去除50-200μm的表皮层，暴露下方乳头层，切取100-800μm的乳头层，得到真皮基质；

优选地，在-15到-80℃的温度下将所述断层皮肤处理为冻干片，更优选地，温度为-27℃；

3)使用固定剂固定步骤2)取得的真皮基质，固定时间为1-3小时，固定后使用蒸馏水洗涤；所述固定剂为含有1.5g/100ml戊二醛的0.01M磷酸钠缓冲液；

优选地，所述固定时间为2小时；

4)使用碱性溶液去除真皮基质中的细胞成分，反应时间为10小时-60小时，得到脱细胞真皮基质；

优选地，反应时间为20-30小时；

优选地，所述碱性溶液为碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、氢氧化铵、碱金属醇化物、有机胺或其混合物，更优选地，所述碱性溶液的当量浓度为1.5-2.0N；进一步优选地，所述碱性溶液为当量浓度1.5-2.0N的NaOH或KOH；

5)使用缓冲液或蒸馏水洗涤所述脱细胞真皮基质10-50分钟，优选地，洗涤时间为30分钟；优选地，所述缓冲液为0.01M的磷酸钠水溶液；

6)将步骤5)得到的脱细胞真皮基质在孵育液中孵育10-30小时；所述孵育液为0.5g/ml的门冬氨酸水溶液、0.5g/ml的谷氨酸水溶液或0.1M甘氨酸水溶液，优选地，所述孵育液为0.5g/ml的门冬氨酸水溶液或0.1M甘氨酸水溶液，优选地，所述孵育液的PH值为7.4。

3.一种根据权利要求1的脱细胞真皮基质的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1)取皮，取包括表皮层和真皮层的断层皮肤；

优选地，所述断层皮肤从捐献尸体中获得；

2)使用固定剂固定步骤1)取得的断层皮肤，固定时间为1-3小时，固定后使用蒸馏水洗涤；所述固定剂为含有1.5g/100ml戊二醛的0.01M的磷酸钠缓冲液；

优选地，所述固定时间为2小时；

3)使用碱性溶液去除皮肤中的细胞成分，反应时间为10小时-60小时，得到脱细胞的断层皮肤；

优选地，反应时间为20-30小时；

优选地，所述碱性溶液为碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、氢氧化铵、碱金属醇化物、有机胺或其混合物；更优选地，所述碱性溶液的当量浓度为1.5-2.0N；进一步优选地，所述碱性溶液为当量浓度1.5-2.0N的NaOH或KOH；

4)使用缓冲液或蒸馏水洗涤所述脱细胞的断层皮肤10-50分钟；

优选地，洗涤时间为30分钟；优选地，所述缓冲液为0.01M的磷酸钠水溶液；

5)将步骤4)获得的脱细胞的断层皮肤处理为冻干片，然后去除50-200μm的表皮层，暴露下方乳头层，切取100-800μm的乳头层，得到脱细胞真皮基质；

优选地，在-15到-80℃的温度下将所述断层皮肤处理为冻干片，更优选地，温度为-27℃；

6)将步骤5)得到的脱细胞真皮基质在孵育液中孵育10-30小时；所述孵育液为0.5g/ml的门冬氨酸、0.5g/ml的谷氨酸或0.1M的甘氨酸溶液，优选地，所述孵育液为0.5g/ml的门冬氨酸或0.1M的甘氨酸溶液，优选地，所述孵育液的PH值为7.4。

4.一种根据权利要求1的脱细胞真皮基质使用前的处理方法，所述方法为在使用前，将所述脱细胞真皮基质浸泡于无菌生理盐水0.5-4小时，优选地为浸泡1小时，用100％无菌甘油脱水5-20分钟，优选地脱水时间为10分钟，再用无菌生理盐水冲洗1-5次，优选地冲洗3次，即可使用。

5.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质或根据权利要求2-3所述的制备方法制备的脱细胞真皮基质在制备角膜修补材料中的应用。

6.根据权利要求1所述的脱细胞真皮基质或根据权利要求2-3所述的制备方法制备的脱细胞真皮基质在制备用于治疗和/或改善角膜变薄的疾病的材料中的应用。