[发明专利]重组类禽型H1N1流感病毒灭活疫苗株(JS40/PR8)及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201410460909.5 | 申请日： | 2014-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN104232594B | 公开（公告）日： | 2017-05-31 |
| 发明（设计）人： | 杨焕良;陈化兰;陈艳;乔传玲 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司11139 | 代理人： | 孙皓晨,马鑫 |
| 地址： | 150001 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 类禽型 h1n1 流感病毒 疫苗 js40 pr8 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组的类禽型H1N1流感病毒灭活疫苗株，其特征在于以H1N1亚型猪流感病毒A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)为表面抗原血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因供体，以流感病毒A/PR/8/34(H1N1)为聚合酶PB2亚基，聚合酶PB1亚基，聚合酶PA亚基，核蛋白(NP)，基质蛋白(M)和非结构蛋白(NS)6个内部基因的供体，通过自然重组得到，所得到的重组的类禽型H1N1流感病毒灭活疫苗株命名为A型流感病毒A/swine/Jiangsu/40/PR8(H1N1)，保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其保藏号为CCTCC NO：V201419。
2.权利要求1所述的重组的类禽型H1N1流感病毒灭活疫苗株在制备预防类禽型H1N1流感病毒所导致疾病的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其中所述药物用于预防动物或人的类禽型H1N1流感病毒感染。
4.一种构建权利要求1所述的重组的类禽型H1N1流感病毒灭活疫苗株的方法，该方法包括：
(1)用类禽型H1N1流感病毒株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)和鸡胚适应疫苗株A/PR/8/34(H1N1)共同接种鸡胚尿囊腔或细胞进行自然重组；
(2)用抗所述鸡胚适应疫苗株A/PR/8/34(H1N1)的抗体筛选，除去表面基因来源于所述鸡胚适应疫苗株A/PR/8/34(H1N1)的毒株；
(3)将筛选得到的毒株在鸡胚上进行3代有限克隆纯化，利用Trizol强裂变剂法，提取病毒RNA，进行反转录，然后用设计的流感病毒A/PR/8/34(H1N1)和类禽型H1N1流感病毒国内分离株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)病毒的各8对特异性鉴别引物进行RT-PCR扩增，然后，对扩增产物进行核酸凝胶电泳，鉴定得到的重组病毒为HA和NA来自于类禽型H1N1流感病毒国内分离株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)、6个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M及NS来自流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的重组病毒，即得。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的引物包括：
只能扩增出类禽型H1N1流感分离株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)基因的8个特异性片段而不能扩增出流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的任何片段的类禽型H1N1流感分离株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)的8对特异性鉴别引物，引物序列如下：
以及只能扩增出流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的8个特异性片段而不能扩增出类禽型H1N1流感分离株A/swine/Jiangsu/40/2011(H1N1)的任何片段的流感病毒A/PR/8/34(H1N1)的8对特异性鉴别引物，引物序列如下所示：
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