[发明专利]一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合

说明书

技术领域

本发明涉及一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗及犬瘟热活疫苗组合。属于兽用生物制品领域。

背景技术

水貂病毒性肠炎是由水貂肠炎病毒(Mink Enteritis Virus，MEV)引起的一种急性、烈性和高度接触性传染病，主要以剧烈腹泻为主要特征，1949年由加拿大学者Sehofield首次发现本病(Schofield F W.Virus enteritis in mink.Am Vet,1949,30:6512654.)。1981年姜廷秀等(姜挺秀，朴厚坤，王喜龙等.疑似水貂病毒性肠炎初报.毛皮动物饲养，1981，(2):224.)首先报道了我国发生水貂病毒性肠炎，此后该病逐渐蔓延全国，给我国养貂业带来巨大的经济损失(高云，宋纯林，吴玉林等水貂病毒性肠炎(MEV)流行病学调查及防治.特产科学实验，1984，(4)33234.)。

犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus，CDV)引起的犬科、鼬科和熊科动物的一种高度接触性传染病，病死率30％～80％。犬瘟热病毒为副粘病毒科麻疹病毒属，呈圆形或不整形。直径100～300nm，含有直径为15～17nm的螺旋状核衣壳，外覆一层双轮膜，膜上长1.3nm的纤突。发病率高，几乎可以达到100％，且临床症状多样，容易继发其他细菌、病毒的混合感染和二次感染，死亡率高，素有“毁灭性传染病”之称，对养犬业、毛皮动物养殖业造成巨大损失。自1809年Jeneer首次报道犬瘟热，1905年Carre通过动物接种分离的滤过性致病因子复制出病例以来，各国学者已经对犬瘟热病毒的分离培养、理化特性、流行病学以及免疫与防制作了大量的研究。近年来，其感染范围不断扩大，危害也越来越大，甚至已经有人感染犬瘟热病毒的病例。Mee等也从患Pagets疾病的病人组织中检测出犬瘟热病毒核酸，这使得犬瘟热有可能成为继狂犬病之后犬传播给人的第二种疫病。在我国，随着近几年来军犬、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅度增加，以及异地交流的不断增多，犬瘟热在我国犬中的发病率和致死率也均有升高的趋势，而且临床症状也与以往的表现有所不同。

水貂病毒性肠炎与犬瘟热是毛皮动物养殖中发病率最高的两种疾病，均需要免疫预防，目前这两种疾病均有单独疫苗可以使用。但是由于毛皮动物养殖中，每次免疫均会对动物造成较大的应激，因而寻找一种将两种疫苗联合使用的方法极为重要。由于传统的水貂病毒性肠炎灭活疫苗使用的是甲醛溶液灭活剂，如果与犬瘟热活疫苗共同使用则会造成犬瘟热抗原的失效，无法实现联合使用。

烷化剂属于细胞毒类药物，又称生物烷化剂(Bioalkylating Agengts)，在体内能形成碳正离子或其他具有活泼的亲电性基团的化合物，进而与细胞中的生物大分子中含有丰富电子的基团发生共价结合，使其丧失活性或使DNA分子发生断裂，导致细胞死亡。其中二乙烯亚胺(BEI)可以破坏病毒核酸，不改变病毒蛋白质，而且不同病毒对BEI的抵抗力不尽相同，同时BEI对核酸具有较高的诱变作用。本发明使用BEI溶液作为水貂病毒性肠炎灭活疫苗生产过程中的灭活剂，使得水貂病毒性肠炎灭活疫苗满足了作为犬瘟热活疫苗稀释液进行使用的可能，并通过各种创造性试验，实现了水貂病毒性肠炎灭活疫苗与犬瘟热活疫苗的联合应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合，将水貂病毒性肠炎灭活疫苗作为犬瘟热活疫苗稀释液，达到降低疫苗成本、减少动物应激、提高经济效益的目的。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案在于：

1.一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合，是由水貂病毒性肠炎灭活疫苗和犬瘟热活疫苗组成，其中水貂病毒性肠炎灭活疫苗兼作犬瘟热活疫苗的稀释剂。

2.一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合中水貂病毒性肠炎灭活疫苗使用的灭活剂为烷化剂，优选灭活终浓度为0.05％～0.3％的BEI溶液。

3.一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合中两种疫苗具有每3毫升水貂病毒性肠炎灭活疫苗稀释1头份犬瘟热活疫苗的配比关系，其中水貂病毒性肠炎灭活疫苗灭活前病毒含量为每毫升1.0×10^7.0TCID₅₀以上，犬瘟热活疫苗每头份病毒含量为10^4.5TCID₅₀以上。

4.一种水貂病毒性肠炎灭活疫苗-犬瘟热活疫苗组合中水貂病毒性肠炎灭活疫苗制备步骤包括：

(1)将F81细胞系或者CRFK细胞系进行传代和培养；