[发明专利]一种快速检测病毒性猪传染病的方法

权利要求书

1.一种猪病毒性传染病检测试剂盒，其特征在于，所述猪病毒性传染病检测试剂盒包括如下引物：

PRRSV，基因ID EF473139，引物5′-ATGGCCAGCCAGTCAATC-3′；5′-GCCCTAATTGAATAGGTG-3′；

PRV，基因ID AF207700，5′-GGTGGCGGGACAAATGGTA-3′；5′-TTCTAGGTGCTGCTGGTGTG-3′；

PPV，基因ID AY502115，5′-CAACGACACGGGCCTCTAC-3′；5′-AGCGCCAGCACAAACAGC-3′。

2.权利要求1所述的猪病毒性传染病检测试剂盒，其特征在于，该猪病毒性传染病检测试剂盒应用在检测猪病毒性传染病中。

3.根据权利要求2所述的猪病毒性传染病检测试剂盒，其特征在于，所述猪病毒性传染病检测试剂盒，用于同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒病毒和猪伪狂犬病毒。

4.根据权利要求1所述的猪病毒性传染病检测试剂盒，其特征在于，所述猪病毒性传染病检测试剂盒的使用方法包括以下步骤：

步骤一，发病猪生殖道分泌物、流产胎儿组织及其他相关病料组织；

步骤二，组织加液氮研磨呈粉末状，Trizol-氯仿法提取组织核酸；

步骤三，AMV反转录酶进行RNA反转录，合成cDNA；

步骤四，建立20μLPCR反应体系，体系中2×rTaq DNA聚合酶混合液12.0μL，cDNA 2.0μL，引物6.0μL，每条1.0μL；各1.0μL，进行PCR；

混匀后置PCR扩增仪中，扩增条件为：

预变性  94℃  5min；

94℃变性30s；

56℃退火30s  30个循环；

72℃延伸30s；

末次延伸  72℃  5min；

4℃保存备用或直接电泳；

步骤五，PCR产物进行凝胶电泳，根据电泳条带大小，判定感染病原。

5.根据权利要求4所述的猪病毒性传染病检测试剂盒，其特征在于，在步骤四中，引物混合物为：

5′-ATGGCCAGCCAGTCAATC-3′、5′-GCCCTAATTGAATAGGTG-3′；

5′-GGTGGCGGGACAAATGGTA-3′、5′-TTCTAGGTGCTGCTGGTGTG-3′；

5′-CAACGACACGGGCCTCTAC-3′、5′-AGCGCCAGCACAAACAGC-3′。