[发明专利]一种复叶耳蕨愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法在审
申请号: | 201410462973.7 | 申请日: | 2014-09-12 |
公开(公告)号: | CN104263691A | 公开(公告)日: | 2015-01-07 |
发明(设计)人: | 杨存 | 申请(专利权)人: | 南京通泽农业科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/04 | 分类号: | C12N5/04;C12N5/02 |
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地址: | 210046 江苏省南京市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 复叶 耳蕨愈伤 组织 悬浮 细胞 快速 繁殖 方法 | ||
技术领域
本发明涉及组培条件下复叶耳蕨悬浮细胞的培养,属于植物技术领域。
背景技术
复叶耳蕨,Arachniodes exilis(Hance)Ching,鳞毛蕨科,主要分布在热带和亚热带地区,在我国分布于江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、广东、四川、贵州、云南等地。多数生长于海拔几百到上千米不等的山谷混交林西下。喜凉爽、湿润环境和排水良好的砂质壤土,喜漫射光,耐阴性强,生长适温14-20℃。复叶耳蕨亦是一种中药,用于清热解毒,敛疮,目前其使用主要是野外采集,没有大规模的推广和种植,利用组培技术对其进行繁殖更是无人研究。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供复叶耳蕨细胞悬浮培养的快速繁殖方法,可以快速获得大量的复叶耳蕨细胞,操作简单可控,细胞繁殖率高,生长周期短,可以无限度的提供制药原料,有助于复叶耳蕨药用成份的有效开发和利用。
为解决上述技术问题,本发明采用下列技术方案:
取复叶耳蕨的叶片,先在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面污渍,流水冲洗20min,超净工作台上次氯酸钠处理10min,无菌水冲洗5-7遍,灭菌处理过的复叶耳蕨叶片接入培养基配方为Nitsch+TDZ0.2mg/L+IBA2mg/l+10%椰乳诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养,附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L,PH5-6,光照1000lx,温度15℃,诱导出来的愈伤组织接种到培养基Nitsch+2,4-D0.2mg/L+TDZ0.2mg/L+EDTA+消泡剂的三角瓶中,每瓶接种70ml溶液,接种后置于旋转式搅拌通气培养,附加蔗糖30g/L,PH5.8,光照1500lx,温度15℃,悬浮培养出来的细胞接入固体平板,筛选次生代谢物质含量高的细胞株。
采用本发明制备的复叶耳蕨悬浮细胞,生长速度快,操作简单,能耗小,污染小,可筛选出次生代谢物含量高的突变体。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
取复叶耳蕨的叶片,先在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面污渍,流水冲洗20min,超净工作台上次氯酸钠处理10min,无菌水冲洗5-7遍,灭菌处理过的复叶耳蕨叶片接入培养基配方为Nitsch+TDZ0.2mg/L+IBA1mg/l+10%椰乳诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养,附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L,PH5-6,光照1000lx,温度15℃,诱导出来的愈伤组织接种到培养基Nitsch+2,4-D0.1mg/L+TDZ0.1mg/L+EDTA+消泡剂的三角瓶中,每瓶接种70ml溶液,接种后置于旋转式搅拌通气培养,附加蔗糖30g/L,PH5.8,光照1500lx,温度15℃,悬浮培养出来的细胞接入固体平板,筛选次生代谢物质含量高的细胞株。
实施例2
取复叶耳蕨的叶片,先在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面污渍,流水冲洗20min,超净工作台上次氯酸钠处理10min,无菌水冲洗5-7遍,灭菌处理过的复叶耳蕨叶片接入培养基配方为Nitsch+TDZ0.2mg/L+IBA3mg/l+10%椰乳诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养,附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L,PH5-6,光照1000lx,温度15℃,诱导出来的愈伤组织接种到培养基Nitsch+2,4-D0.2mg/L+TDZ0.2mg/L+EDTA+消泡剂的三角瓶中,每瓶接种70ml溶液,接种后置于旋转式搅拌通气培养,附加蔗糖30g/L,PH5.8,光照1500lx,温度15℃,悬浮培养出来的细胞接入固体平板,筛选次生代谢物质含量高的细胞株。
实施例3
取复叶耳蕨的叶片,先在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面污渍,流水冲洗20min,超净工作台上次氯酸钠处理10min,无菌水冲洗5-7遍,灭菌处理过的复叶耳蕨叶片接入培养基配方为Nitsch+TDZ0.2mg/L+IBA2mg/l+10%椰乳诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养,附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L,PH5-6,光照1000lx,温度15℃,诱导出来的愈伤组织接种到培养基Nitsch+2,4-D0.2mg/L+TDZ0.1mg/L+EDTA+消泡剂的三角瓶中,每瓶接种70ml溶液,接种后置于旋转式搅拌通气培养,附加蔗糖30g/L,PH5.8,光照1500lx,温度15℃,悬浮培养出来的细胞接入固体平板,筛选次生代谢物质含量高的细胞株。
实施例4
取复叶耳蕨的叶片,先在漂白粉中浸泡2min,毛刷去除表面污渍,流水冲洗20min,超净工作台上次氯酸钠处理10min,无菌水冲洗5-7遍,灭菌处理过的复叶耳蕨叶片接入培养基配方为Nitsch+TDZ0.2mg/L+IBA2mg/l+10%椰乳诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养,附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L,PH5-6,光照1000lx,温度15℃,诱导出来的愈伤组织接种到培养基Nitsch+2,4-D0.1mg/L+TDZ0.2mg/L+EDTA+消泡剂的三角瓶中,每瓶接种70ml溶液,接种后置于旋转式搅拌通气培养,附加蔗糖30g/L,PH5.8,光照1500lx,温度15℃,悬浮培养出来的细胞接入固体平板,筛选次生代谢物质含量高的细胞株。
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