[发明专利]一种碗蕨悬浮细胞培养的快速繁殖方法在审
申请号: | 201410463013.2 | 申请日: | 2014-09-12 |
公开(公告)号: | CN104170746A | 公开(公告)日: | 2014-12-03 |
发明(设计)人: | 杨存 | 申请(专利权)人: | 南京通泽农业科技有限公司 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 无 | 代理人: | 无 |
地址: | 210046 江苏省南京市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 悬浮 细胞培养 快速 繁殖 方法 | ||
1. 一种碗蕨悬浮细胞培养的快速繁殖方法,包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养,其主要步骤如下:
(1)取碗蕨幼嫩的叶片,在超净工作台上对其进行消毒处理;
(2)取步骤(1)消毒处理过的叶片接种入N6+KT1mg/L+2,4-D2mg/L+0.5g/L活性炭培养基中进行愈伤组织诱导,附加6.5g/L琼脂,30g/L蔗糖,暗室培养,温度20℃;
(3)取步骤(2)中诱导出来的碗蕨愈伤组织接入N6+KT1mg/L+2,4-D1mg/L进行愈伤组织继代增殖培养,附加蔗糖30g/L,琼脂6.5g/L,pH5.8,光照1500lx,温度20℃;
(4)取步骤(3)增殖后的愈伤组织筛选长势稳定均一的愈伤组织接种入液体培养基6,7-V+ NAA0.1-0.2mg/L+6-BA0.1-0.2mg/L+Zn2+,Ca2+,Mg2+0.5-2mmol/L中进行悬浮振荡培养,4-5周后取出,烘干。
2. 按照权利要求1所述的一种碗蕨悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(1)中所述碗蕨无菌叶片的获得为,取碗蕨幼嫩叶片,在漂白粉中浸泡2min,流水冲洗12min,水流不宜过大,超净工作台上0.1%氯化汞处理7min,无菌水冲洗5遍。
3. 按照权利要求1所述的一种碗蕨悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(4)悬浮细胞培养中添加了一定浓度的有机离子可以调控愈伤组织中次生代谢物的含量。
4. 按照权利要求1所述的一种碗蕨悬浮细胞培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(4)愈伤组织的接种量为0.5g,采用搅拌通气式设备,温度22℃,每60ml细胞悬浮液装入250ml锥形瓶中。
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