[发明专利]一种节果决明悬浮细胞培养的快速繁殖方法

权利要求书

1.一种节果决明悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：

（1）春季取节果决明幼嫩的叶片，在超净工作台上对其进行消毒处理；

（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接种入MS+IAA0.5mg/L+6-BA2.5mg/L+半胱氨酸150mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加6.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，暗室培养，温度25℃；

（3）取步骤（2）中诱导出来的节果决明愈伤组织接入ER+KT0.3mg/L+2,4,5-T0.3mg/L+麦芽提取液0.05%进行愈伤组织增殖，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2000lx，温度25℃；

（4）取步骤（3）增殖后的愈伤组织筛选长势稳定均一的愈伤组织接种入液体培养基ER+ NAA0.1-0.2mg/L+2,4-D0.3-0.5mg/L+0.4-0.5mmol/L腐胺中进行悬浮振荡培养，4-5周后称重计算增殖率。

2.按照权利要求1所述的一种节果决明悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中所述节果决明无菌叶片的获得为，取节果决明幼嫩叶片，在漂白粉中浸泡2min，流水冲洗25min，水流不宜过大，超净工作台上0.1%氯化汞处理8min，无菌水冲洗5-7遍，吸水纸吸去表面水分。

3.按照权利要求1所述的一种节果决明悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（2）诱导培养基中附加了半胱氨酸150mg/L，且采用暗室培养可以防止诱导过程中的褐化现象。

4.按照权利要求1所述的一种节果决明悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（3）增殖培养中附加了麦芽提取液0.05%，对愈伤组织的增殖具有显著作用。

5.按照权利要求1所述的一种节果决明悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4）悬浮细胞培养中附加了腐胺，可以促进悬浮细胞的生长。

6.按照权利要求1所述的一种节果决明悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4）悬浮细胞培养采用搅拌通气式设备，温度25℃，每70ml细胞悬浮液装入300ml三角瓶中。