[发明专利]一种水蓑衣悬浮细胞培养的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及水蓑衣悬浮细胞培养的快繁方法，属于植物技术领域。

背景技术

水蓑衣，HygropHila salicifolia(Vahl)，草本，爵床科，又名穿心蛇、鱼骨草、九节花、墨菜。产广东、广西、海南、台湾、香港、福建、江西、浙江、安徽、湖南、湖北、四川、云南等省区。生于溪沟边或洼地等潮湿处。亚洲东南部至东部旧本琉球）有分布，以全草入药。全年可采，鲜用，或洗净晒干。清热解毒，化瘀止痛。用于咽喉炎，乳腺炎，吐血，衄血，百日咳；外用治骨折，跌打损伤，毒蛇咬伤，组培方法研究目前尚处于起步阶段，悬浮细胞培养还无人研究，悬浮细胞具有操作简单可控，生产成本低，繁殖率高等优点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种水蓑衣悬浮细胞的快速繁殖方法，由该方法所制备得到的水蓑衣悬浮细胞生长分裂速度快，操作工艺简单可控，有助于获得大量的药用次生代谢产物，且生长周期短。

本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的叶片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水冲洗18min，超净工作台上10%安替福民溶液+两滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗5-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%琼脂中进行愈伤组织诱导，光照强度600lx，光期5h，暗期19h，诱导出来的水蓑衣愈伤组织接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）进行愈伤组织的诱变增殖，pH5.8，光照1200lx，温度28℃，增殖后筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂+60mg/L酵母，30天后称重，计算增殖率。

采用本发明制备的水蓑衣悬浮细胞增殖速度快，细胞中次生代谢物含量高，生产成本低，且生长周期短。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的叶片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水冲洗18min，超净工作台上10%安替福民溶液+两滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗5-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%琼脂中进行愈伤组织诱导，光照强度600lx，光期5h，暗期19h，诱导出来的水蓑衣愈伤组织接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）进行愈伤组织的诱变增殖，pH5.8，光照1200lx，温度28℃，增殖后筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基N₆+2，4-D0.5mg/L+6-BA4.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂+50mg/L酵母，30天后称重，计算增殖率。

实施例2

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的叶片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水冲洗18min，超净工作台上10%安替福民溶液+两滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗5-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%琼脂中进行愈伤组织诱导，光照强度600lx，光期5h，暗期19h，诱导出来的水蓑衣愈伤组织接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）进行愈伤组织的诱变增殖，pH5.8，光照1200lx，温度28℃，增殖后筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂+80mg/L酵母，30天后称重，计算增殖率。

实施例3

取水蓑衣新抽稍上幼嫩的叶片，毛刷去除表面污垢，在漂白粉中浸泡2min，流水冲洗18min，超净工作台上10%安替福民溶液+两滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗5-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入N₆+2,4-D1mg/L+50mg/L半胱氨酸+3%蔗糖+0.65%琼脂中进行愈伤组织诱导，光照强度600lx，光期5h，暗期19h，诱导出来的水蓑衣愈伤组织接入N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA5.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂，附加0.005%-0.1%的（EMS）进行愈伤组织的诱变增殖，pH5.8，光照1200lx，温度28℃，增殖后筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基N₆+2，4-D1.0mg/L+6-BA4.0mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂+60mg/L酵母，30天后称重，计算增殖率。