[发明专利]一种珍珠莲悬浮细胞的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及组培条件下珍珠莲悬浮细胞的培养，属于生物技术领域。

背景技术

珍珠莲，Ficus sarmentosa var. henryi，桑科，木质攀援匍匐藤状灌木，又名凉粉树、冰粉树、岩石榴、幼枝密被褐色长柔毛，叶革质，卵状椭圆形，长8-10厘米，宽3-4厘米，先端渐尖，基部圆形至楔形，表面无毛，背面密被褐色柔毛或长柔毛，基生侧脉延长，侧脉5-7对，小脉网结成蜂窝状；叶柄长5-10毫米，被毛。产台湾、浙江、江西、福建、广西、广东、湖南、湖北、贵州、云南、四川、陕西、甘肃。常生于阔叶林下或灌木丛中。本变种在我国分布广，各地常见。清热解毒，消炎止泻。治小儿高热，惊风，肺炎，膀胱炎，百日咳，脚气病，肠炎，痢疾。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供珍珠莲悬浮细胞培养的快速繁殖方法，生长周期短，次生代谢物产量高，增殖率高，有利于获得大规模的珍珠莲悬浮细胞以及药用次生代谢物质。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

选用珍珠莲幼嫩的叶片，用肥皂水刷洗5分钟，自来水冲洗15分钟，在超净工作台上用2％的次氯酸钠消毒8分钟，无菌水冲洗7次，接种在N₆+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+多胺10mmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为暗光照，温度24℃，湿度75%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基N₆+6-BA4.0mg/L+2，4-D6.0mg/L+NAA0.5mg/L+柠檬酸12-15mg/L中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养两代后挑选均一稳定的愈伤组织接入MS+KT2.0mg/L+TDZ2.0mg/L+2,4-D2.0mg/L+5-磺基水杨酸0.5%-3%的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度5000lx，光照16h/d，温度24℃，湿度85%，洗涤，干燥。

采用本发明制备的珍珠莲悬浮细胞，产量大，能耗少，生长周期短，次生代谢物产量高。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

选用珍珠莲幼嫩的叶片，用肥皂水刷洗5分钟，自来水冲洗15分钟，在超净工作台上用2％的次氯酸钠消毒8分钟，无菌水冲洗7次，接种在N₆+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+多胺10mmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为暗光照，温度24℃，湿度75%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基N₆+6-BA4.0mg/L+2，4-D6.0mg/L+NAA0.5mg/L+柠檬酸12mg/L中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养两代后挑选均一稳定的愈伤组织接入MS+KT2.0mg/L+TDZ2.0mg/L+2,4-D2.0mg/L+5-磺基水杨酸0.5%的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度5000lx，光照16h/d，温度24℃，湿度85%，洗涤，干燥，悬浮细胞增长率59%。

实施例2

选用珍珠莲幼嫩的叶片，用肥皂水刷洗5分钟，自来水冲洗15分钟，在超净工作台上用2％的次氯酸钠消毒8分钟，无菌水冲洗7次，接种在N₆+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+多胺10mmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为暗光照，温度24℃，湿度75%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基N₆+6-BA4.0mg/L+2，4-D6.0mg/L+NAA0.5mg/L+柠檬酸13mg/L中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养两代后挑选均一稳定的愈伤组织接入MS+KT2.0mg/L+TDZ2.0mg/L+2,4-D2.0mg/L+5-磺基水杨酸1%的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度5000lx，光照16h/d，温度24℃，湿度85%，洗涤，干燥，悬浮细胞增长率55%。

实施例3

选用珍珠莲幼嫩的叶片，用肥皂水刷洗5分钟，自来水冲洗15分钟，在超净工作台上用2％的次氯酸钠消毒8分钟，无菌水冲洗7次，接种在N₆+6-BA2.5mg/L+IBA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+多胺10mmol/L培养基上进行愈伤组织诱导培养，条件为暗光照，温度24℃，湿度75%，将诱导出来的愈伤组织接入培养基N₆+6-BA4.0mg/L+2，4-D6.0mg/L+NAA0.5mg/L+柠檬酸15mg/L中进行愈伤组织增殖培养，增殖培养两代后挑选均一稳定的愈伤组织接入MS+KT2.0mg/L+TDZ2.0mg/L+2,4-D2.0mg/L+5-磺基水杨酸3%的液体培养基中进行悬浮细胞培养，培养条件为光照强度5000lx，光照16h/d，温度24℃，湿度85%，洗涤，干燥，悬浮细胞增长率54%。