[发明专利]N-乙酰氨基葡萄糖在制备检测肿瘤的试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种N-乙酰氨基葡萄糖在制备检测肿瘤的试剂盒中的应用。

背景技术

自20世纪80年代，专家利用杂交瘤技术获得了能识别肿瘤特异性大分子糖蛋白抗原(carbohydrate antigen,CA)，并研制了单克隆抗体识别系统。发展至今在目前肿瘤体外早期诊断试剂领域，存在竞争性分析和非竞争性夹心分析两种分析方法。从实验室检测的角度，肿瘤标志物分为血清/血浆肿瘤标志物与组织细胞肿瘤标志。血清/血浆肿瘤标志物大致分为三类：1)胚胎抗原。胚胎期表达、正常成人不表达、伴随肿瘤发生又重新表达的抗原，如AFP、CEA。2)肿瘤相关糖脂及糖蛋白。CA199、CA50、CA242、CA724、CA125、CA153等。3)激素肽、酶、蛋白。这些在正常组织中有表达，但是在肿瘤组织中只是过量表达的抗原。PSA、NSE、TPA等。对这些肿瘤标志物的检测也发展出很多微量免疫检测技术，比如：1959年Berson与Yalow创立了放射免疫测定(radioimmunoassay,RIA),1971年瑞典的Engvall建立了酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)以及近期的化学发光免疫测定(chemluminescence immunoassay,CLIA)、电化学发光免疫测定(electrochemiluminesence immunoassay,ECLI)、时间分辨荧光免疫测定(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)。目前对于任何一个肿瘤标志物不管采用那种测定技术，鉴定肿瘤和非肿瘤患者不是100％准确的。比如AFP对原发性肝癌的特异性为70％；CEA对结肠癌特异性为60％、胰腺癌为80％、胃癌为60％、肺癌为75％和乳腺癌为60％；CA125对卵巢癌为82％；CA153对乳腺癌早期为75％；CA724对胃癌为42％，NSE对小细胞肺癌为70％。以上的标志物并不是广谱的，大都只能诊断一种或几种肿瘤，并且以CEA为例，其对胰腺癌诊断效果最好，为80％，虽然对结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌也有效，但最低的特异性仅有60％，换句话说，40％是会漏诊的。肿瘤的早期发现与诊断，对于提高患者治愈率、延长患者生命是至关重要的，致力于肿瘤研究的学者在探索和寻找有效的肿瘤标志从未松懈。

肿瘤早期诊断至今仍然是世界性难题，现用的肿瘤标志物只能检出约70％的肿瘤，且绝大多数已属晚期。现行肿瘤标志物大都确切结构尚不明确，难于复制。

现行商品试剂盒的模式分为两类，夹心模式和竞争模式，且在肿瘤标志物领域只有双结合体的夹心模式。

发明内容

基于上述缺陷，本发明的目的是提供N-乙酰氨基葡萄糖在制备检测肿瘤的试剂盒中的应用。本发明确立的新血清标志物N-乙酰氨基葡萄糖是首个可以写出分子式和结构式的肿瘤抗原，结构的明确使结合体的制备难题迎刃而解，意义非凡。

本发明提供的N-乙酰氨基葡萄糖在制备检测肿瘤的试剂盒中的应用；其中，所述检测肿瘤的试剂盒为以血清为检测样本的试剂盒；所述肿瘤为恶性肿瘤。

所述应用中，所述肿瘤为乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、食管癌、口腔癌、结肠癌、胆管癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、膀胱癌、胃癌、肾癌和贲门癌的一种或几种。

N-乙酰氨基葡萄糖分子式：C₈H₁₅NO₆，分子量：221.21，化学代号-GlcNAc，其结构如图1A所示它可以与载体蛋白偶联得到抗原，制备可以检测肿瘤的特异性结合体，如抗体、核酸适配体、凝集素等，这些特异性结合体可以与N-乙酰氨基葡萄糖特异性结合。

上述载体蛋白可以为常用的载体蛋白，如卵白蛋白(OVA)、牛血清白蛋白(BSA)与多管式载体血蓝蛋白(KLH)，也可以为糖蛋白，如粘蛋白及其他的蛋白中的一种或几种。

例如，在本发明的实施例中，申请人在血清中分离出了N-乙酰氨基葡萄糖链接粘蛋白1(Mucin1，代号Mu)形成的本专利所提纯的肿瘤抗原Mu-GlcNAc(代号MA153)，它链接的位置在粘蛋白1内糖链的暴露端，见图1B，粘蛋白1(Mu)结构的氨基酸序列为(-PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA-)x N,即粘蛋白1(Mu-)的氨基酸序列为:-PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA-的多次重复排列。

本发明的另一目的是提供检测N-乙酰氨基葡萄糖的物质在制备检测肿瘤的试剂盒中的应用。