[发明专利]一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法。

背景技术

 流感病毒是一种可致哺乳类及禽类急性上呼吸道感染的RNA病毒。目前，对于该病毒及其各种亚型的检测和防控已成为全世界面临解决的医学问题。流感病毒表面抗原主要分为两种：血凝素蛋白和唾液酸苷酶。其中血凝素蛋白的分布占了病毒表面的80%，因此对血凝素蛋白的检测可提高流感病毒识别的敏感度。现有技术中对血凝素蛋白的检测绝大多数采用生化免疫学方法，例如荧光免疫发光、免疫印迹法以及酶联免疫吸附法等。这些方法在广泛被利用的同时，也突现出其不便之处：在检测抗原-抗体反应过程中，需要引入荧光探针或蛋白酶作为标记物，由于探针标记物的存在，一定程度上复杂了样品制备及检测过程，增加了检测时间，降低了检测效率。

因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，旨在解决现有的检测方法检测时间长、检测效率低的问题。

本发明的技术方案如下：

一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其中，包括步骤：

a、将样本溶于PBS缓冲液中配制成不同浓度的抗原溶液H9，将单克隆抗体F10与抗原溶液H9等体积比反应得到反应物；

b、将反应物置于室温孵育一段时间，然后震荡，并在低温条件下过夜，使抗原抗体复合物结构成型；

c、将复合物置于检测盒中，并在太赫兹光束焦斑处垂直置入检测盒，记录与浓度有关的太赫兹强度吸收光谱；

d、根据与浓度相关的太赫兹强度吸收光谱判断是否有吸收峰，当没有时，则检测到样本中含有血凝素蛋白。

所述的基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其中，所述步骤a中，单克隆抗体F10以固定浓度230μg/ml与抗原溶液等体积比反应。

所述的基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其中，所述步骤c中，检测盒中的复合物厚度为0.3cm。

所述的基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其中，所述步骤c中，所述太赫兹光束的频率范围为0.1~1.5THz。

所述的基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其中，所述步骤b中，在室温条件下孵育30分钟。

所述的基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，其中，所述步骤a中，将样本溶于PBS缓冲液中配制成7.5、15、29、56、113、225以及430μg/ml的浓度梯度。

有益效果：本发明的方法对血凝素蛋白的检测灵敏度大大提高，优于ELISA等传统检测技术，并且无需引入标记物，节省了大量的检测时间，减少了操作步骤，提高了检测效率。

附图说明

图1为本发明实施例中太赫兹强度吸收光谱图。

图2为本发明实施例中太赫兹介电损耗角与抗原-抗体结合位点比关系图。

图3为现有技术中采用ELISA方法检测的浓度关系图。

图4为本发明实施例中太赫兹介电损耗角与太赫兹强度吸收光谱的关系图。

具体实施方式

本发明提供一种基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明的基于太赫兹时域光谱的无标记血凝素蛋白检测方法包括步骤：

a、将样本溶于PBS缓冲液中配制成不同浓度的抗原溶液H9，将单克隆抗体F10与抗原溶液H9等体积比反应得到反应物；

b、将反应物置于室温孵育一段时间，然后震荡，并在低温条件下过夜，使抗原抗体复合物结构成型；

c、将复合物置于检测盒中，并在太赫兹光束焦斑处垂直置入检测盒，记录与浓度有关的太赫兹强度吸收光谱；

d、根据与浓度有关太赫兹强度吸收光谱判断是否有吸收峰，当没有时，则检测到样本中含有血凝素蛋白。

其中的步骤a中，先将样本溶于PBS缓冲液中配制成不同浓度的抗原溶液H9，以形成浓度梯度，具体是将样本溶于pH7.4的PBS缓冲液中，配制成7.5、15、29、56、113、225以及430μg/ml的浓度梯度的抗原溶液H9（即血凝素蛋白溶液）。

然后将单克隆抗体F10与抗原溶液H9等体积比反应得到反应物。