[发明专利]一种间充质干细胞体外向黑素细胞定向分化诱导的方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱导的方法，其特征在于，包

括如下步骤：脐带组织块的获取；原代脐带来源的间充质干细胞的培养、细胞的传代培养；获得的脐带来源的间充质干细胞的鉴定；体外诱导分化为黑素细胞，黑素细胞的培养及鉴定。

2.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱导的

方法，其特征在于，所述的间充质干细胞来源于脐带。

3.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱导的

方法，其特征在于，所述的脐带组织块的获取的步骤包括：

手术台获取人脐带后，将其浸没于0.9%灭菌生理盐水中，无菌运输至实

验室；

在超净台取出，含1%双抗（青霉素和链霉素）PBS缓冲液洗涤3次，以

除去血渍和充分清洗脐静脉管腔，剥离掉动静脉，取脐带结缔组织，剪为4-5mm3大小的组织块。

4.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱导的

方法，其特征在于，所述的原代脐带来源的间充质干细胞的培养、细胞的传代培养步骤包括：

接种组织块于6孔细胞培养板内板内预先加0.5-1mL的DMEM/F12培养

基，置培养板于细胞培养箱内培养，培养条件为37 ℃、5%体积CO2饱和湿度； 

细胞培养24h后首次换液，以后每2-3d换液一次，培养12-14 d后原代

细胞长出并长满60%后去除组织块； 

hUC-MSCs的传代培养：置培养板于细胞培养箱内培养，条件温度37 ℃，

5%CO2饱和湿度，24h后首次换液，以后每2-3d更换培养基，显微镜观察细胞形态并拍照。

5.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱导的

方法，其特征在于，所述体外诱导分化为黑素细胞，黑素细胞的培养步骤包括：

将hUC-MSCs细胞传代后接种于24孔板，使用DMEM/12培养基培养细胞至70%融合后，更换黑素诱导培养基诱导培养，2天换液一次，细胞达60%融合时传代，连续诱导培养9周。

6.根据权利要求4或5所述的一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱

导的方法，其特征在于，所述DMEM/F12培养基中DMEM和F12的比例为1:1；

所述DMEM/F12培养基中含10%胎牛血清。

7.根据权利要求5所述的一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱

导的方法，其特征在于，所述黑素诱导培养基成分包括50ng/mL SCF、20%MCDB201、4ng/mL bFGF、100nM EDN3、50% L-Wnt3a上清、20pM cholera toxin、0.05μM 地塞米松、50nM TPA、20%低糖DMEM、1×胰岛素铁硒传递蛋白、104M L-抗坏血酸、1 mg/mL 亚油酸-牛血清白蛋白。

8.根据权利要求1所述的一种间充质干细胞体外向黑色素细胞定向分化诱导的方法，其特征在于，所得到的黑素细胞用于白癜风的治疗。