[发明专利]一种优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法

权利要求书

1.一种优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化超低温保存的方法对拟南芥幼苗进行保存，具体步骤如下：

1)装载液处理：室温下，将拟南芥幼苗在装载液中浸泡处理20～30分钟后移除装载液；

2)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡处理拟南芥幼苗40～60分钟；

3)液氮保存：保持拟南芥幼苗浸泡在玻璃化溶液中的状态，并置于液氮中保存；

所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。

2.如权利要求1所述优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述拟南芥幼苗为在MS固体培养基上培养后的拟南芥幼苗，在MS固体培养基上培养的方法为：将拟南芥种子置于MS固体培养基上，每天先进行光照培养8～12h，光强100～200μmol/m²，温度20～27℃，每天光照培养剩余时间进行黑暗培养，黑暗培养温度为20～25℃，循环每天光照培养和黑暗培养。

3.如权利要求2所述优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述拟南芥种子为先经春化处理过的拟南芥种子，所述春化处理为将所述拟南芥种子在0～10℃下放置24～72h。

4.如权利要求3所述优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述春化处理为将所述拟南芥种子在4～6℃下放置40～50h。

5.如权利要求3所述优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述拟南芥种子在春化处理前先经消毒处理，消毒处理工艺为：将拟南芥种子用65～75％乙醇浸泡10～30s，再使用无菌水冲洗，然后使用含15～25wt％的NaClO和0～0.03wt％的吐温20的水溶液浸泡5～15分钟，并使用无菌水冲洗。

6.如权利要求1所述优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述装载液为含有1～2mol/L丙三醇和0.3～0.5mol/L蔗糖的MS培养液。

7.如权利要求1所述优化拟南芥幼苗玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚砜、0.4mol/L蔗糖和0.1～0.5g/L石墨烯量子点的MS培养液。

8.一种拟南芥幼苗的解冻及再培养方法，所述拟南芥幼苗为采用如权利要求1～7任一权利要求所述方法保存的拟南芥幼苗，所述拟南芥幼苗的解冻及再培养方法为将拟南芥幼苗从液氮中取出，先水浴解冻，然后去除玻璃化溶液后用洗涤液洗涤，最后转入MS固体培养基中恢复培养。

9.如权利要求8所述解冻及再培养方法，其特征在于，水浴解冻的条件为在30～40℃的水浴中解冻60～120s，用洗涤液洗涤的工艺为：用洗涤液在室温下浸泡30～50分钟，并每隔5～10分钟换一次洗涤液，所述洗涤液为含有1.0～1.5mol/L蔗糖的MS培养液。

10.如权利要求8所述解冻及再培养方法，其特征在于，所述再培养方法为将拟南芥幼苗每天先光照培养8～12h，光强100～200μmol/m²，培养温度为20～27℃，每天中剩余时间采用黑暗培养，黑暗培养温度为20～25℃。