[发明专利]一种优化金线莲类原球茎玻璃化法超低温保存效果的方法

权利要求书

1.一种优化金线莲类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化超低温保存的方法对金线莲类原球茎进行保存，具体步骤如下：

1)预培养：将金线莲类原球茎置于预培养基上，在光照培养箱中预培养1～5天；

2)装载液处理：室温下，将金线莲类原球茎在装载液中浸泡处理40～60分钟后移除装载液；

3)玻璃化溶液处理：在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理金线莲类原球茎40～60分钟；

4)液氮保存：保持金线莲类原球茎浸泡在玻璃化溶液中的状态，并将其置于液氮中超低温保存；

所述玻璃化溶液为含有0.1～0.5g/L石墨烯量子点的玻璃化冷冻保护液。

2.如权利要求1所述优化金线莲类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述金线莲类原球茎预培养基为含有40～80g/L山梨醇的MS固体培养基。

3.如权利要求1所述优化金线莲类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述装载液为含有1～2mol/L丙三醇、0.3～0.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L KNO₃的MS培养液。

4.如权利要求1所述优化金线莲类原球茎玻璃化超低温保存效果的方法，其特征在于，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚砜，0.4mol/L蔗糖和0.1～0.5g/L石墨烯量子点的MS培养液。

5.一种金线莲类原球茎的解冻及再培养方法，所述金线莲类原球茎为采用如权利要求1～4任一权利要求所述方法保存的金线莲类原球茎，所述金线莲类原球茎的解冻及再培养方法为将金线莲类原球茎从液氮中取出，先水浴解冻，然后去除玻璃化溶液后用洗涤液洗涤，最后转入恢复培养基中恢复培养。

6.如权利要求5所述解冻及再培养方法，其特征在于，水浴解冻的条件为在30～40℃的水浴中解冻60～120s。

7.如权利要求5所述解冻及再培养方法，其特征在于，所述洗涤液为含有1.0～1.5mol/L蔗糖和5～10mmol/L KNO₃的MS培养液洗涤，洗涤工艺为：用洗涤液在室温下将金线莲类原球茎浸泡10～30分钟。

8.如权利要求5所述解冻及再培养方法，其特征在于，所述恢复培养基为含有1～2mg/L 6-苄基腺嘌呤、0.1～0.5mg/L萘乙酸和30g/L蔗糖的MS固体培养基。