[发明专利]以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法

权利要求书

1.一种以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是利用脲酶特异性催化尿素生成氨和二氧化碳的体系，新生成的氨能提高所述体系的pH值，使N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇的荧光发生猝灭，从而表现出荧光发射光谱特征的变化，能直接用于尿素的含量测定。

2.根据权利要求1所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是所述金纳米团簇溶液，脲酶溶液和尿素测定液按体积比为4：4：1混合，25°C反应40分钟测定发射光强度值F₆₅₀以判断尿素的浓度。

3.根据权利要求1或2所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是所使用的脲酶浓度为10 U/mL。

4.根据权利要求3所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸还原氯金酸的方法制备：将浓度为0.02~0.18 mol/L 的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液和浓度为0.1~0.8 mol/L的氢氧化钠溶液加入到浓度为0.01~0.1 g/L的氯金酸溶液中，混匀，置于20~70°C水浴恒温反应0~3.5小时，反应结束后用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行透析纯化处理，得到N-乙酰-L-半胱氨酸-金纳米团簇荧光材料水溶液。

5.根据权利要求4所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸还原氯金酸的方法制备：将0.6 mL浓度为0.5 mol/L的氢氧化钠溶液与0.4 mL浓度为0.02 g/L的氯金酸溶液加入到4 mL浓度为0.08 mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混匀，置于37°C恒温水浴槽中反应2.5 h，反应液由浅黄色变为无色，反应结束后用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行纯化处理得到N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇溶液。

6.根据权利要求4或5所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是利用N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇在650 nm处的发射光强度值（F₆₅₀）以判断尿素含量，所使用的激发波长为355 nm。

7.根据权利要求6所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是将金纳米团簇溶液和脲酶溶液混合均匀后，将不同浓度尿素溶液加入到上述混合液中，在25°C的恒温水浴槽中反应后，测定发射光强度值F₆₅₀，在尿素浓度为0.055~0.55mmol/L的范围内F₆₅₀与尿素浓度呈线性关系，检测限为0.055mmol/L。

8.一种以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，包括如下步骤：取新鲜人尿液，用pH=6.0的缓冲液稀释，取0.05 mL稀释液加入到由0.2 mL N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇溶液和0.2 mL、浓度为10 U/mL的脲酶溶液组成的混合液中，在25°C的恒温水浴槽中反应40分钟，测定发射光强度值F₆₅₀，通过标准曲线进行定量，获得尿液中的尿素含量。

9.根据权利要求8所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸还原氯金酸的方法制备：将0.6 mL浓度为0.5 mol/L的氢氧化钠溶液与0.4 mL浓度为0.02 g/L的氯金酸溶液加入到4 mL浓度为0.08 mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混匀，置于37°C恒温水浴槽中反应2.5 h，反应液由浅黄色变为无色，反应结束后用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行纯化处理，纯化后的金纳米团簇溶液放置于4°C冰箱避光保存。

10.根据权利要求8或9所述的以荧光金纳米团簇为探针的尿素测定方法，其特征是所述的新鲜人尿液为用pH=6.0的醋酸盐缓冲液稀释200倍后选取的0.05 mL稀释液。