[发明专利]一种制备高纯度丹参酮IIA和丹参酮I的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物有效成分提取领域，具体地涉及一种高纯度丹参酮的分离纯化方法。

技术背景

丹参的化学成分主要有两大类，脂溶性成分属醌、酮型结构的有：丹参酮，隐丹参酮，异丹参酮，异隐丹参酮，羟基丹参酮，丹参酸甲酯，亚甲基丹参醌，二氢丹参酮，丹参新醌A、B、C、D，二氢异丹参酮，新隐丹参酮等。水溶性酚性酸化合物有：丹参素、丹参酚酸、丹参酚酸A、B、C、D、E、G；迷迭香酸，迷迭香酸甲酯，紫草酸草酸单甲脂，紫草酸二甲酯，紫草酸乙酯，紫草酸B，原儿茶醛，咖啡酸，异阿魏酸等。《中国药典》2010版中药材临床标准中规定了丹参的功能主治标准：活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈。

在临床上，丹参提取物广泛应用于治疗心血管病的中成药制剂，其中丹参酮IIA对心肌具有修复作用，可减轻缺氧引起的心肌损伤，同时改善心肌收缩力，促进心肌再生。此外还具有抑制ADP诱导血小板凝集、抑制血小板TXA2的合成、释放缩血管物质及促进纤维蛋白降解等作用，可降低冠心病、脑缺血、中风及心肌梗塞病人的全血和血浆粘度，减少红细胞压积，通过抗凝降粘的作用使患者血液流变学指标恢复正常。

传统的丹参酮提取工艺为：取丹参，切成小段，加水于80℃提取两次，合并提取液，滤过，滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.18～1.22(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为70％，静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得。该工艺制备的丹参酮为酮类的混合物，丹参酮IIA、丹参酮I的的纯度较低。

为了克服现有技术的不足，制备出高纯度的丹参酮，本发明提供了一种采用SephadexLH-20分离介质的层析分离纯化技术。SephadexLH20的分离原理以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用，特点为：1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子3、载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变。本发明采用SephadexLH-20层析柱对丹参酮粗品进行分离纯化，通过优选分离条件，纯化出丹参酮IIA、丹参酮I单体。

发明内容

本发明提供了一种工艺简单、成本低的丹参酮IIA、丹参酮I提取和纯化方法。

本发明的丹参酮提取和纯化方法是以丹参为原料，采用95％乙醇或无水乙醇作为提取剂，提取出丹参酮类组分，再采用SephadexLH20层析柱对其进行纯化，制备出丹参酮IIA、丹参酮I单体。

本发明所述原料为丹参(拉丁学名SalviamiltiorrhizaBunge，又名赤参，紫丹参，红根等)的根茎。

本发明提取及纯化方法如下：

1.原材料预处理：取干燥后的丹参根，除去其中的可见杂物后，用粉碎机粉碎，过40目筛备用。

2.醇提：将步骤1的丹参根粉置于提取罐中，加入10～20倍重量的95％乙醇或无水乙醇，于55～85℃浸提1～4小时，重复浸提2～4次。

3.过滤浓缩：将步骤2的浸提液用滤布过滤，减压蒸馏回收乙醇，将浸提液浓缩至稠膏状。

4.SephadexLH20层析分离：用相当于0.5～2倍丹参根粉重量的甲醇溶解步骤3制取的稠膏，用滤布过滤除去不溶性杂质后，以10～50mL/min的流速通过Sephadex-LH20层析柱。上样结束后，用甲醇/异丙醇混合溶液进行洗脱，流速为15～60mL/min。甲醇∶异丙醇∶水的比例＝5～7∶1～3∶2～4。分别收集橘红色洗脱液(含丹参酮IIA)和棕红色洗脱液(含丹参酮I)。

5.将步骤4中收集的洗脱液于40～65℃减压蒸馏浓缩成浓缩液，采用喷雾干燥的方法制成粉末状成品。喷雾干燥时进风口温度为110～135℃，出风口温度为95～115℃。

本发明采用SephadexLH20柱层析分离技术，经过发明人的多次实验，对流速、洗脱液所用溶剂、洗脱液所用混合溶剂的比例、喷雾干燥条件等工艺条件不断进行优化，使得本发明的方法具有以下优点和积极的效果：

(1)相对于传统方法，大幅提高了丹参酮IIA和丹参酮I的提取效率和纯度，并且最大程度地保留了有效成分的活性；

(2)提取过程节能环保，能耗低；

(3)所用的分离介质SephadexLH20，具有操作简单、容易再生、成本低等优势，非常适于大规模生产；