[发明专利]一种与原发性肺癌辅助诊断相关的低频高外显性遗传标志物及其应用

说明书

发明领域

本发明属于基因工程及肿瘤医学领域，涉及一种与原发性肺癌辅助诊断相关的低频高外显性遗传标志物及其应用。

背景技术

肺癌是目前全球受累人数最多的恶性肿瘤。据国际癌症研究署(IARC)估计，2012年肺癌新发病例182.5万人，死亡159.0万人，位居全球范围内肿瘤发病率和死亡率的首位。由于持续增长的烟草消费、环境污染以及生活方式的改变，近二十年来，我国肺癌发病和死亡一直呈上升趋势，仅2000年至2005年间，中国肺癌的发病人数和因肺癌死亡的人数分别增加了12万和10万，据估计，2012年我国男性肺癌发病率为52.8/10万，女性为20.4/10万，超过发达的工业化国家水平。英国著名肿瘤学家R.Peto预言：如果中国不及时控制吸烟和空气污染，到2025年我国每年肺癌将超过100万，成为世界第一肺癌大国。由此可见，肺癌是威胁全球及我国居民生命和健康的重要疾病之一，是亟待解决的重大公共卫生问题。

目前，对肺癌的一级预防(病因预防)尚无明确、有效的预防措施，但如果能加强二级预防，做到早发现、早诊断和早治疗，则可以明显改善疾病预后，提高肺癌患者的5年生存率。因此，争取早期诊断是肺癌防治的重点。目前肺癌早期诊断的方法主要有影像学检查(胸部X线检查、胸部CT、核磁共振、正电子发射计算机体层扫描)、微创介入检查(支气管镜检、荧光纤维支气管镜检、超声纤维支气管镜检等)、痰液脱落细胞学检查、肿瘤生物标记等。但是现在临床常用的胸部X线、胸部CT和纤维支气管镜检存在一些弊端。胸部X线检查难以发现，或难以鉴定局部粘膜上较小的肿瘤；胸部CT不能确定病变的性质，可能存在假阳性或假阴性。纤维支气管镜检对肿瘤的浸润深度、有无转移了解不清。另外目前临床所用肺癌标志物的特异性不强，血清癌胚抗原(CEA)在肺癌早期多不增高，对诊断意义不大。病理活组织检查作为肺癌诊断的金标准，虽然在临床肺癌确诊中居于重要地位，但由于需要有创取活检组织，不适宜作为临床健康筛查的手段。

自20世纪60年代Doll和Hill通过病例-对照研究和队列研究首次发现吸烟与肺癌的关系以来，烟草暴露已经被认为是肺癌发生的最主要环境危险因素。研究表明，吸烟者发生肺癌的风险可比非吸烟者高出10倍。肺癌家庭聚集性的研究显示，遗传因素在肺癌的发生中同样扮演重要角色。双生子研究表明，肺癌是遗传与环境共同作用的结果。流行病学研究表明，80％以上的肺癌可以归咎为烟草暴露，但仅有不到20％的吸烟者发生肺癌，说明在同等环境暴露下，具有不同遗传背景的个体对肺癌的易感性不同。低频高外显性遗传标志物是指较小等位基因频率(MAF)小于0.05的遗传变异。遗传变异的存在被认为赋予了个体不同的表型性状，以及对环境暴露、药物治疗等因素的不同反应，因此可能是导致个体对常见疾病发病和预后易感性差异的重要遗传基础。

通过疾病易感的遗传标志物来诊断疾病的发生，灵敏、准确和快速，具有广阔的应用前景。近年来，疾病遗传标志物已经成为临床和科研工作者的研究热点，在肿瘤和心脑血管疾病等常见重大疾病的应用价值已初见端倪。

然而，目前还没有将低频高外显性遗传标志物应用于肺癌诊断的报道，若能筛选出肺癌易感的低频高外显性遗传变异作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对我国肺癌诊断现状将会是个有力的推动，也为其药物筛选、药效评价及靶向治疗开辟了新的途径。

发明内容

本发明的目的是针对上述技术问题，提出一种与原发性肺癌辅助诊断相关的低频高外显性遗传标志物及其应用。

本发明的第二个目的是提供上述遗传标志物的特异性引物。

本发明的第三个目的是提供上述遗传标志物及其特异性引物在制备原发性肺癌辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明第四个目的是提供原发性肺癌辅助诊断试剂盒。

发明人通过分离和研究原发性肺癌患者及健康对照外周血DNA中的遗传多态性，寻找一组与原发性肺癌高度相关的高特异性和敏感性的低频高外显性遗传标志物，并研制出可便于临床应用的原发性肺癌辅助诊断试剂盒，为原发性肺癌的筛查和诊断提供数据支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：