[发明专利]细胞融合瘤苗及其制备方法和在胃癌防治中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞融合瘤疫苗，尤其涉及使用一种以胃癌细胞标准株制成的瘤苗，可对多种胃癌细胞产生保护作用，实现生物体对胃癌细胞的主动性免疫功能的建立，以促进机体对胃癌细胞的免疫防护功能。

背景技术

胃癌(gastric cancer)是最常见的胃肿瘤，根据世界卫生组织估计，胃癌是全世界排名第四个最普遍被诊断的癌症，而且在所有癌症中死亡率排名第二。胃癌也是中国最常见的恶性肿瘤之一，在中国其发病率居各类肿瘤的首位，每年约有17万人死于胃癌，接近全部恶性肿瘤死亡人数的1/4，且每年还有2万以上新的胃癌病人产生出来。胃癌被视为国际间重要的健康危机。目前，针对胃癌的预防性策略的研究，特别是对胃癌疫苗的研究，在国内和国际均处于起步阶段，尚无阶段性研究成果出现。

树突状细胞(dendritic cells，DC)自1973年由Steinman和Cohn报道以来，该细胞已被广泛和深入地研究。DC细胞是目前所发现的功能最强的专职抗原呈递细胞(antigen presenting cell，APC)，该细胞能够激活静息状态的T细胞，从而实现识别和杀死肿瘤细胞的重要作用。

在对肿瘤疫苗的探索中，研究者们采用了多种策略来研制DC瘤苗，以激发抗肿瘤特异性免疫应答。主要包括负载肿瘤抗原的DC、肿瘤抗原致敏的DC和肿瘤抗原基因转染的DC等。在这些DC疫苗的临床应用中，Rosenberg等(Nat Med,2004,10(9):909-915)总结了35篇肿瘤疫苗的临床应用结果，仅有7.1％(14/198)的受试人群有客观反应。其失败的原因主要有以下三方面：一方面是已确定的特异性肿瘤抗原较少，各种突变因素导致肿瘤细胞容易通过抗原变异逃避针对单一抗原表位的免疫作用；另一方面，由于提取的肿瘤蛋白在体内易被蛋白质水解酶降解，诱导的免疫效应不能持久，难以获得理想的治疗效应；最后，基因修饰法制备的肿瘤疫苗，不仅费时，而且基因导入效率和基因转移的靶向性等技术难题尚未完全解决，影响因素较多。由此可以见，传统的DC肿瘤疫苗在临床上的效果并不理想，这就要求我们去探寻一种新的、更有效的DC肿瘤疫苗。

在这种背景下，DC—肿瘤融合细胞疫苗(DCs-tumor fused vaccine)成为当前肿瘤免疫治疗研究的热点。因为融合瘤苗既能够表达肿瘤的所有抗原成分，又具有DC的抗原提呈能力，即融合苗细胞能呈递肿瘤细胞所有的抗原。在肿瘤细胞特异性抗原仍未得到明确的鉴定或由于突变等因素的影响不可能及时鉴定的前提下，用DC融合细胞递呈全肿瘤细胞抗原被认为是一种简单而有效的抗肿瘤方法。融合细胞可以通过聚乙二醇(PEG)化学方法或电融合仪获得。因为肿瘤细胞在融合前经高强度的γ射线照射或丝裂霉素-C(mitomycin C,MMC)处理，所以，DC—融合瘤疫苗是没有肿瘤增殖危险的。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种细胞融合瘤苗，可直接靶向胃癌术后或化疗后的微小病灶，并可主动渗入外周淋巴器官中残余的胃癌细胞，实现胃癌的主动预防和彻底治疗，使胃癌发病的安全隐患与风险大大降低，针对传统治疗的预后产生较大的改观。

本发明的另一个目的在于提供一种细胞融合瘤苗制备方法，通过化学方法在树突状细胞表面负载胃癌细胞全抗原制得。

本发明的再一个目的在于提供一种细胞融合瘤苗在用于制备治疗胃癌疾病药物中的应用。

本发明的又一个目的在于提供一种疫苗，其含有树突状细胞表面负载胃癌细胞全抗原的细胞融合瘤苗。

本发明提供的一种细胞融合瘤苗，其由灭活胃癌细胞与树突状细胞融合，在树突状细胞表面负载胃癌细胞全抗原。

本发明提供的一种细胞融合瘤苗制备方法，树突状细胞和灭活肿瘤细胞按5:1～10:1比例混合，细胞总量为1×10⁷～2×10⁷，采用聚乙二醇(分子量Mw为500Da～15,000Da)以融合树突状细胞和灭活肿瘤细胞，制得树突状细胞-胃癌细胞融合瘤苗。