[发明专利]一种捕食线虫性真菌的培养方法

权利要求书

1.一种捕食线虫性真菌的培养方法，其特征在于，包括步骤：

1)在无菌条件下，将生长在玉米粉琼脂培养基上的少孢节丛孢菌接种于沙氏葡萄糖肉汤培养基中，玉米粉琼脂培养基与沙氏葡萄糖肉汤培养基体积比为0.1～0.2cm³：10～20mL，于25℃下，100r/min的恒温摇床中培养7d；所述少孢节丛孢菌为捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)CIM1菌株，该菌株的保藏号为：CGMCC No.8058；

其中，所述玉米粉琼脂培养基的制备方法为：按照玉米粉40g加入1000mL蒸馏水的比例称取玉米粉，加入蒸馏水中加热煮沸，待溶液沸腾后，用微火持续煮沸1h，期间不断进行搅拌，最后用蒸馏水将溶液补足至1000mL，用450目纱网过滤，将滤液用蒸馏水稀释100倍，调节pH值至6.0～6.2，最后加入2％琼脂粉，于121℃条件下高压灭菌20min之后，于4℃放置备用；所述沙氏葡萄糖肉汤培养基的制备方法为：按照10g沙氏葡萄糖肉汤培养基、0.1g琼脂粉、200mL蒸馏水的比例，称取沙氏葡萄糖肉汤培养基和琼脂粉，加入蒸馏水，将溶液加热至沸腾时立即取出，使溶质充分溶解，于121℃条件下高压灭菌15min，放置备用；

2)将步骤1)已培养好的少孢节丛孢菌沙氏葡萄糖肉汤培养基混合物，倒入玉米粒或大麦粒批量培养基中，沙氏葡萄糖肉汤培养基的体积与玉米粒或大麦粒批量培养基质量比例为1ml：9～11g，最后分别将沙氏葡萄糖肉汤培养基混合物与玉米粒或大麦粒批量培养基搅拌均匀，于25℃恒温培养箱中培养。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤2)培养后，用孢子洗脱液少量多次地洗脱分生孢子，最后再用洗脱液将分生孢子悬液均定容到10mL，混匀后用白细胞计数板计数，得出每克培养基所含分生孢子的数量。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述孢子洗脱液制备方法为：吸取2mL吐温-80，加入1000mL蒸馏水中，于121℃条件下，高压灭菌20min后，放于室温下备用。