[发明专利]人源化的FcγR小鼠

说明书

本申请是申请号为201080064262.4、申请日为2010年12月17日、发明名称为“人源化的FcγR小鼠”的中国发明专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2010/060925的国家阶段申请，该国际申请要求申请日为2009年12月21日，申请号为61/288,562的美国临时申请的优先权。

发明领域

本发明领域是缺失内源鼠FcγR基因的遗传修饰的非人动物，包括内源FcγR基因被人FcγR基因替代的遗传修饰的动物，包括能够表达至少2、3、4或5种功能性人低亲和力FcγR基因的小鼠，以及包括包含不表达内源低亲和力FcγR基因的免疫细胞的遗传修饰的小鼠。

背景

Fc受体(FcR)是在哺乳动物的进行免疫系统的多种功能的免疫系统的细胞的表面上发现的蛋白质。FcR以多种类型存在于多种细胞上，并且介导多种免疫功能，例如结合附着至被感染的细胞或侵袭性病原体的抗体、刺激吞噬细胞或细胞毒性细胞以通过抗体介导的吞噬作用或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)破坏微生物或感染的细胞。

ADCC是这样的过程：免疫系统的效应细胞裂解被抗体结合的靶细胞。该过程依赖于对外源抗原或细胞的先行接触，从而产生抗体应答。ADCC可通过效应细胞例如天然杀伤(NK)细胞，通过效应细胞表面上表达的FcR对本身结合至外源抗原或细胞的抗体的Fc部分的结合来介导。由于FcR在免疫应答中起着中心作用，因此需要有共表达多种人FcR的有用的非人动物，包括共表达多种人低亲和力FcR的非人动物。存在对用于研究和阐明人疾病治疗(特别是抗肿瘤治疗和用于治疗自身免疫疾病的治疗)和药物开发(特别是在人抗体药剂的开发、设计和测试中)的人FcR功能和人的ADCC过程的非人动物模型。

附图概述

图1是小鼠的野生型低亲和力FcγR基因座的示意图，显示了小鼠FcγRIIB,FcγRIV和FcγRIII基因以及用于这些基因的靶向缺失的小鼠FcγR靶向载体，其包括侧翼连接有位点特异性重组位点的新霉素盒。

图2显示了就B细胞(抗-CD19),NK细胞(抗-NKp46)和巨噬细胞(抗-F4/80)门控的脾细胞的直方图，包括野生型和低亲和力FcγRα链基因缺陷型小鼠(mFcγR KO)的内源mFcγRII和mFcγRIII基因的表达。

图3A-3D显示了在人源化CD20小鼠(hCD20)和培育成FcγR敲除小鼠的人源化CD20小鼠(hCD20/FcγR KO)中在几个淋巴细胞区室(lymphocyte compartment)：骨髓(图3A)、血液(图3B)、淋巴结(图3C)和脾(图3D)中利用具有小鼠Fc(Ab 168)或人Fc(Ab 735)的人抗-人CD20抗体对B细胞进行的体内耗尽。对于每一个图，y-轴显示门控的B细胞(B220⁺/IgM⁺或B220⁺/CD19⁺)的百分比，x-轴显示每一个动物组的抗体剂量：10mg/kg对照抗体(C)，2mg/kg人抗-人CD20抗体(2Ab和10mg/kg人抗-人CD20抗体(10Ab)。

图4是低亲和力小鼠FcγR基因座的新霉素靶向缺失和用于将两个人低亲和力FcγR基因(hFcγRIIIA和hFcγRIIA)插入缺失的小鼠基因座的第二靶向载体的示意性描述，所述第二靶向载体包括侧翼连接有位点特异性重组位点的潮霉素盒。为了在血小板上表达hFcγRIIA，使用了可操作地连接于人FcγRIIIA-IIA靶向载体的hFcγRIIA基因的延长的启动子区域；为了阻止在血小板上表达hFcγRIIA，删除或实质上删除所述启动子区域。

图5A显示针对NK细胞(抗-NKp46和巨噬细胞(抗-F4/80)的门控的脾细胞的直方图，包括野生型和人FcγRIIIA-IIA纯合子小鼠(人FcγRIIIA/FcγRIIA HO)的人FcγRIIIA的表达。

图5B显示针对嗜中性粒细胞(抗-Ly6G)和巨噬细胞(抗-F4/80)的门控的脾细胞的直方图，包括野生型和人FcγRIIIA-IIA纯合子小鼠(人FcγRIIIA/FcγRIIA HO)的人FcγRIIA的表达。