[发明专利]EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂及其制备方法

权利要求书

1.一种EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，至少包括

一反应膜，所述反应膜上划有检测线和质控线，所述检测线含有鼠抗人IgA单克隆抗体；所述质控线含有生物素；

一抗原垫，所述抗原垫含有由生物素标记的重组EB病毒VCA抗原；

一金标垫，所述金标垫含有胶体金标记的亲和素复合物。

2.权利要求1所述的EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，其特征在于所述检测线以包被浓度为1.4mg/ml的鼠抗人IgA单克隆抗体划线，所述质控线以包被浓度为≥2.2mg/ml的生物素划线，所述胶体金标记的亲和素复合物中亲和素的标记浓度为25～40μg/ml，所述生物素标记的重组EB病毒VCA抗原中生物素的标记浓度为25～30μg/ml。

3.权利要求1所述的EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂，其特征在于进一步包括一用于加载检测样品的样品垫。

4.一种检测试剂盒，其包括权利要求1所述的EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂。

5.制备权利要求1所述的EB病毒VCA-IgA抗体检测试剂的方法，包括：

1)划线NC膜的制备：用包被浓度的鼠抗人IgA单克隆抗体在NC膜上划检测线；用包被浓度的生物素在NC膜上划质控线；

2)金标垫的制备：将标记浓度的亲和素与胶体金偶联制备胶体金标记的亲和素复合物，浸泡涂抹玻璃纤维素膜制备金标垫；

3)抗原垫的制备：将标记浓度的生物素与重组EB病毒VCA抗原进行偶联制得生物素标记的重组EB病毒VCA抗原复合物，浸泡涂抹玻璃纤维素膜制备抗原垫。

6.权利要求5所述的方法，包括：

(1)划线NC膜的制备：用磷酸盐缓冲液将鼠抗人IgA单克隆抗体稀释到包被浓度为1.4mg/ml，将生物素稀释成包被浓度为≥2.2mg/ml，用金标划线机将两种包被液划到NC膜上，干燥后保存备用；

(2)金标垫的制备：将标记浓度为25～40μg/ml的亲和素与胶体金进行偶联制得胶体金标记的亲和素复合物，以转速为10000转/分钟离心30分钟，弃上清，加入胶体金结合物稀释液至原体积的80％，然后用稀释液按60μl/cm²浸泡涂抹玻璃纤维素膜制成金标垫，干燥后保存备用；

(3)抗原垫的制备：将标记浓度为25～30μg/ml的生物素与重组EB病毒VCA抗原进行偶联制得生物素标记的重组EB病毒VCA抗原复合物，将混合液按60μl/cm²浸泡涂抹玻璃纤维素膜制成抗原垫，干燥后保存备用；

(4)切割装配：将划线NC膜、金标垫、抗原垫、吸水纸、样品垫装配成反应板，再用切条机切成4mm的试纸条，装卡后，装入铝箔袋内制成检测试剂。

7.权利要求6所述的方法，其中NC膜、金标垫和抗原垫的制备中干燥条件为37℃干燥3小时。

8.权利要求5所述的方法，其中步骤1)中，检测线的包被浓度为1.4mg/ml，按0.15μl/mm的包被量包被NC膜检测线。

9.权利要求5所述的方法，其中步骤2)中胶体金的制备方法包括：在100ml双蒸水中加入1％氯金酸溶液1.0ml煮沸，在搅拌条件下加入1.4ml的1％柠檬酸三钠溶液，继续煮沸5分钟，自然冷却待用；胶体金标记亲和素的pH为9.0～10.0，亲和素浓度为25μg/ml，胶体金标记亲和素稀释比例为1:8，金标垫的制备条件为稀释后的胶体金结合物按60μl/cm²浸泡涂抹。

10.权利要求5所述的方法，其中步骤3)中，生物素的标记量为30μg/ml，质控线生物素浓度为2.2mg/ml。