[发明专利]一种结晶紫中性红胆盐琼脂及其应用

说明书

技术领域

本发明为微生物领域，特别涉及一种结晶紫中性红胆盐琼脂及其应用。

背景技术

世界上微生物间的多样化和变异性及物种生境的生态复杂性，带来了探讨、了解微生物的广泛性、复杂性和长久性。微生物的一个物种就是一个独特的基因库，微生物的新陈代谢是错综复杂的生命活动，在长期的生物进化中，形成了一套完整统一的灵敏调节系统，依靠这种调节系统，严格控制各种代谢活动。有条不紊协调进行并灵活适应环境。不同培养基，因培养基配方不同，影响其生长和变异情况。

培养基(Medium)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素，用于单种微生物培养和鉴定。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基(如组织培养基)，较长时间的贮存，必须放在3～6℃的冰箱内。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。

培养基根据化学分类为天然培养基、组合培养基和半组合培养基；根据物理分类为液体培养基、固定培养基和脱水培养基；根据微生物分类为选择性培养基、鉴别培养基。

目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合某一菌种的培养基配方，只能用生物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论，参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备，按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基。

培养基设计的基本步骤是：

根据前人的经验和培养基成分确定时一些必须考虑的问题，初步确定可能的培养基成分

通过单因子实验最终确定出最为适宜的培养基成分

当培养基成分确定后，剩下的问题就是各成分最适的浓度，由于培养基成分很多，为减少实验次数常采用一些合理的实验设计方法。这些实验往往基于多因子实验，包含均匀设计、正交实验设计、响应面分析等。

发明内容

本发明克服现有技术中的不足，提供一种结晶紫中性红胆盐琼脂及其应用。

本发明运用生物化学，微生物学及无机、有机、分析化学和荧光技术的原理，对不同的碳源、氮源、无机盐类、维生素、生长促进剂等诸类营养组分的组合进行筛选，对培养基的pH值、离子强度、氧化-还原电势、表面张力、气体环境等物化因子进行了比较，研究出了本发明的培养基。

本发明所采用的技术方案为：

一种结晶紫中性红胆盐琼脂，所述培养基的组分包括EC肉汤、3.0g/L酵母粉、0.002g/L结晶紫、0.03g/L中性红、15.0g/L琼脂、3.0g/L磷酸氢二钾、pH值为7.3-7.5；

在以上方案的基础上所述EC肉汤为每升EC肉汤中含有胰蛋白胨20.0g、乳糖5.0g、磷酸二氢钾2.0g、氯化钠5.0g、三号胆盐1.5g、磷酸氢二钾4.0g，其余为蒸馏水。

本发明还公开了所述的结晶紫中性红胆盐琼脂，用于大肠菌群的固体平板检测。

称取本品41.5g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，煮沸不要超过2分钟。取适宜稀释度样品液1ml，加入到无菌平皿中心，将冷至45±0.5℃的VRBA10-15ml倾注于平皿中。小心旋转平皿将培养基与样液充分混匀。凝固后，再加3-4mlVRBA覆盖平板表层，翻转平板，置于36±1℃培养18-24小时。无需高压灭菌。临用时制备，不得超过3小时。

本发明的有益效果：

1、培养基组方简单，制备操作方便，成本低，利于推广应用；

2、菌生长迅速，变异率低；

3、便于观察，分析。

具体实施方式

实施例1：

一种结晶紫中性红胆盐琼脂，所述培养基的组分包括EC肉汤、3.0g/L酵母粉、0.002g/L结晶紫、0.03g/L中性红、15.0g/L琼脂、3.0g/L磷酸氢二钾、pH值为7.3-7.5；

在以上方案的基础上所述EC肉汤为每升EC肉汤中含有胰蛋白胨20.0g、乳糖5.0g、磷酸二氢钾2.0g、氯化钠5.0g、三号胆盐1.5g、磷酸氢二钾4.0g，其余为蒸馏水。

本发明还公开了所述的结晶紫中性红胆盐琼脂，用于大肠菌群的固体平板检测。