[发明专利]一种真菌发酵液及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种真菌YMF 1.00864发酵液及其应用，属于应用微生物学技术领域。

背景技术：

胆酸(3α,7α,12α-三羟基-5-β-胆烷-24-酸，CA)和鹅去氧胆酸(3α,7α-二羟基-5-β-胆烷-24-酸，CDCA)是一种具有类固醇结构的有机酸，能乳化脂肪，促进其消化作用。胆酸主要用于生化研究，医药中间体，能做为乳化剂、增稠剂和稳定剂，非变性离子去垢剂,和食品添加剂。胆酸钠是利胆药，治疗胆囊炎、胆汁缺乏、肠道消化不良等症。鹅去氧胆酸(CDCA)主要作用是降低胆汁内胆固醇的饱和度，绝大多数患者服用CDCA后(当CDCA占胆汁中胆盐的70％时)，脂类恢复微胶粒状态，胆固醇就处于不饱和状态，从而使结石中的胆固醇溶解、脱落。大剂量的CDCA(每日10～15mg/kg)能够抑制胆固醇的合成，并增加胆石症患者胆汁的分泌，但其中的胆盐和磷脂分泌量维持不变。本品是目前世界上用量最大的治疗胆结石药物之一，又是合成熊去氧胆酸(UDCA)和其他甾体化合物的原料。目前胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CDCA)的制备主要是从家畜(猪、牛、羊、兔)的胆汁中提取。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种真菌YMF 1.00864发酵液及其应用。

本发明是这样实现的：

本发明使用的真菌菌株是青霉(Penicillium sp.)YMF 1.00864,菌株YMF1.00864已于2013年4月1日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.7407。

本发明的真菌YMF 1.00864发酵液，经如下步骤得到：

(1)真菌的培养

将先在YGP固体培养基中常规活化3天的保藏号为CGMCC No.7407的青霉(Penicillium sp.)YMF 1.00864菌种保存在PDA固体培养基斜面上，使用时，在无菌条件下切取±2cm x±2cm的菌块，分别接种于灭菌的YGP、CML、YGS、BEP、YBS液体培养基250mL中，在28℃发酵3天，然后用液体接种法接种YGP液体培养基中，每瓶接种量为25mL，培养条件为500mL三角瓶装量250mL，每株菌发酵5L,28℃，180rpm培养12天；其中：

PDA固体培养基为：去皮马铃薯200g，切成小块后煮沸30min，4层纱布过滤，在滤液中加入20g葡萄糖，加水定容至1L，加入1.5％(m/v)的琼脂，121℃灭菌20分钟后待用；

YGP固体培养基为：酵母膏5g，葡糖糖10g，蛋白胨1g，放入水中加热至完全溶解，加水定容至1L，加入1.5％(m/v)的琼脂则为固体培养基，121℃灭菌20分钟后待用；

CML液体培养基为：称取20g玉米粉，加适量水煮沸30min，4层纱布过滤，定容至1L，121℃灭菌20min；

YGS液体培养基为：称取5g酵母膏、1g大豆蛋白，10g葡萄糖，放入水中加热至完全溶解，加水定容至1L，121℃灭菌20min；

BEP液体培养基为：称取2g牛肉膏、1g蛋白胨、10g葡萄糖，放入水中加热至完全溶解，加水定容至1L，121℃灭菌20min；

YBS液体培养基为：称取2g酵母膏、1g大豆蛋白胨、1g牛肉膏，10g葡萄糖，放入水中加热至完全溶解，加水定容至1L，121℃灭菌20min；

YGP液体培养基为：酵母膏5g，葡糖糖10g，蛋白胨1g，放入水中加热至完全溶解，加水定容至1L，121℃灭菌20分钟后待用；

(2)用现有常规的方法收集和萃取发酵液

将上述真菌YMF 1.00864发酵液过滤得到菌液部和菌丝体部，菌液部分减压浓缩后用乙酸乙酯以体积比1:1萃取三次，合并乙酸乙酯部，减压浓缩蒸干，得到真菌YMF 1.00864发酵液乙酸乙酯部粗提物。

本发明的真菌YMF 1.00864发酵液在制备分离胆酸及鹅去氧胆酸中的应用。

本发明的有效果在于：首次从真菌发酵液中生产制备胆酸及鹅去氧胆酸，由于真菌易培养，周期短及可再生，为胆酸及鹅去氧胆酸的生产提供了一条新资源以及新技术方法。

具体实施方式：